论文部分内容阅读
第一部分 Afatinib作为第二代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)，已有证据显示其对EGFR敏感型突变非小细胞肺癌患者疗效确切。然而，afatinib联合包括放疗在内其它治疗未被详细研究。本研究中，我们通过长期逐级暴露于gefitinib建立了gefitinib耐药细胞株PC-9-GR细胞，建立的PC-9-GR细胞发生获得性T790M突变。Afatinib显著增加了携带获得性T790M突变的PC-9-GR放疗反应，而对原发T790M突变的H1975和EGFR野生型的H460细胞无明显作用。在PC-9-GR细胞中，afatinib阻断了EGFR和ERK的磷酸化，并造成放疗后AKT磷酸化延迟。Afatinib也导致PC-9-GR细胞放疗后凋亡增加，抑制DNA损伤修复功能，并在移植瘤模型中增强了放疗的抑瘤效果。本研究提示afatinib可能对携带获得性T790M突变非小细胞肺癌是一种有潜力的放疗增敏剂，也为以后临床应用afatinib联合放疗提供了理论支撑。 第二部分 临床上发现afatinib能够治疗脑转移，但具体的机制尚不清楚。本研究评价afatinib治疗脑转移的疗效并评估其穿透血脑屏障的能力以及作用靶点。本研究利用建立的小鼠脑转移模型，对肿瘤负荷每周测量一次。肿瘤生长抑制率用TGI=[1-（治疗组肿瘤大小变化/对照组肿瘤大小变化）×100％]表示。我们同时测定afatinib的药动药效学参数。结果发现15 mg/kg和30 mg/kg afatinib能够显著抑制PC-9细胞增殖，第14天时TGI分别为90.2％和105％。血浆afatinib浓度在给予30mg/kg的afatinib后，0.5h浓度为91.4±31.2 nmol/L，1h后达到峰值为417.1±119.9nmol/L，然后逐渐下降。脑脊液中afatinib浓度与血浆类似。Afatinib在血浆和脑脊液的半衰期分别为5.0 h和3.7 h。血浆和脑脊液的AUC(0-24h)分别为2375.5nmol/h和29.1 nmol/h。血浆和脑脊液afatinib浓度呈正相关(r=0.844，p＜0.01)。免疫组化显示pEGFR信号在给予30 mg/kg afatinib1h后降低了90％。药效学分析显示Emax为86.5％，EC50为0.26 nmol/L。脑脊液afatinib浓度和pEGFR之间存在负相关。本研究发现afatinib能够透过血脑屏障抑制肺癌脑转移瘤。脑脊液浓度与血浆浓度相关，并进一步抑制了脑肿瘤组织EGFR磷酸化。我们的研究为临床肺癌脑转移患者应用afatinib治疗提供了证据支持。