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白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种由激活的T细胞产生的细胞因子,通过促进辅助性T淋巴细胞以及细胞毒性T淋巴细胞的增殖,增强人体的免疫能力,现已经成为临床治疗肿瘤和自身免疫性疾病的一种引人注目的生物制剂。为提高IL-2在体内的半衰期,实验室构建了携带有IL2-HSA融合蛋白编码基因的质粒pPIH,并在Pichia pastoris GS115中成功表达。该方法增大了蛋白药物的分子量,降低了异源蛋白的免疫原性,从而可以减少肾小球滤过率和体内清除率,有效提高IL-2在体内的半衰期,具有非常广阔的生产以及临床应用前景。在即将进行的药代动力学研究和后期临床应用中迫切需要一种能够定量检测IL2-HSA融合蛋白的方法。本课题旨在建立一种双抗体夹心ELISA方法,可以定量检测完整的IL2-HSA融合蛋白。首先从已经构建好的IL2-HSA表达菌株Pichia pastoris GS115出发,经发酵培养、蛋白纯化得到纯度较高的IL2-HSA融合蛋白,作为抗原标准品。经过蛋白定量分析,抗原标准品含量为80μg/mL;Westen Blot分析表明,该融合蛋白同时具有IL-2和HSA的免疫原性;利用IL-2依赖细胞株CTLL-2,采用MTT法测定融合蛋白标准品的比活性为1.393×107IU/mg。然后选取两株针对IL2-HSA融合蛋白两端多肽的抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测IL2-HSA融合蛋白原型药物的方法。该检测方法的灵敏度达到10.25 ng/mL,线性检测范围19.53ng/mL～1250ng/mL,相关系数r2>0.988。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为6.19%和8.10%,发酵液上清回收率为98.13%～102.94%,与IL-2、HSA基本无交叉反应,健全性分析表明发酵液及小鼠血清稀释倍数对该方法无影响,稳定性试验显示预包被酶标板可在4℃下稳定存在3个月以上。将该方法用于发酵和纯化过程中的融合蛋白的检测,可以有效检测目的蛋白的含量,为发酵和纯化工艺的优化提供了必要的数据支持,并为后期药代动力学以及临床研究提供了备选分析方法。