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目的:慢性乙型肝炎(CHB)是引起肝硬化、肝衰竭及肝癌的重要原因,严重威胁患者的生存质量,充分了解CHB的发病机制、分析影响疾病发生的相关因素,对于指导临床治疗具有重要意义。研究表明,HBV持续感染与T淋巴细胞耗竭相关,各种抑制性细胞、受体和细胞因子组成的免疫调控微环境在其中发挥着重要作用。髓源性抑制细胞(MDSCs)是一群髓系来源的异质细胞,可通过多种机制发挥免疫抑制功能,但其在CHB发生发展中的作用尚不十分清楚。因此本课题将观察CHB患者外周血中MDSCs及Treg、Th1、Tc1细胞的频数变化规律,分析MDSCs的表达与其他免疫细胞以及患者临床指标间的相关关系,并检测IL-10、TGF-β及IFN-γ的表达水平,探讨MDSCs在CHB发病过程中的临床意义,以期为CHB的临床免疫治疗提供新的思路与实验依据。方法:收集2015年12月-2016年12月于石家庄市第五医院就诊的CHB患者39例作为病例组,其诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》中的诊断标准;并选取同期于石家庄市第五医院进行体检的健康体检者26例作为对照组,病例组与对照组间年龄、性别均具有可比性。收集所有研究对象的基本资料,并采集其外周静脉血,检测肝功能、血清HBV DNA水平等临床指标,采用流式细胞仪检测CD33+CD11b+HLA-DRMDSCs的比例,进而根据其CD14与CD15的表达情况,以CD14+CD15-的MDSCs细胞作为单核细胞型MDSCs(M-MDSCs),以CD14-CD15+的MDSCs细胞作为粒细胞型MDSCs(G-MDSCs),观察两种亚型所占百分比。以密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪检测其外周血中Treg、Th1、Tc1细胞频数,以CD4+CD25+Foxp3+细胞为Treg细胞、CD4+IFN-γ+细胞为Th1细胞、CD8+IFN-γ+细胞为Tc1细胞,分别计算其在CD4+或CD8+T细胞中所占比例。采用ELISA法检测血浆中IL-10、TGF-β及IFN-γ的表达水平。应用SPSS 21.0进行统计学分析,比较病例组与对照组外周血mdscs及其亚型、treg、th1、tc1细胞及il-10、tgf-β等细胞因子的表达有无差异;采用pearson线性相关分析病例组中mdscs及其亚型与treg、th1、tc1细胞的水平是否相关,以及外周血mdscs及其亚型与临床指标的相关关系。采用多元回归模型分析chb患者中mdscs的主要相关因素。双侧p≤0.05时认为差异有统计学意义。结果:1chb患者外周血mdscs的比例明显高于健康对照者(1.19%vs0.33%),差异有统计学意义(z=-4.071,p<0.001);与对照组相比,chb患者mdscs中g-mdscs所占比例升高(z=-2.015,p=0.044),而m-mdscs无明显变化(z=-1.614,p=0.107)。2chb患者外周血treg细胞比例(3.28%)明显高于健康对照者(1.33%),差异有统计学意义(z=-3.065,p=0.002);病例组中th1、tc1细胞的比例也稍高于对照组,但差异无统计学意义(p>0.05)。3根据chb患者是否接受抗病毒治疗,进一步将病例组分为初治组与经治组,初治组与经治组的mdscs、treg细胞频数均明显高于对照组(mdscs:初治组vs经治组vs对照组:1.20%vs1.20%vs0.33%,h=16.70,p<0.001;treg细胞:初治组vs经治组vs对照组:3.24%vs3.28%vs1.33%,h=9.985,p=0.007),但初治组与经治组间mdscs、treg细胞的分布无统计学差异(p>0.05);三组间mdscs中两种亚型所占百分比及th1、tc1细胞频数分布,差异均无统计学意义(p>0.05)。4初治chb患者外周血中mdscs水平与th1细胞呈负相关(r=-0.645,p=0.013),但与treg或tc1细胞不具有相关性(p>0.05);mdscs的两种亚型:g-mdscs、m-mdscs与treg、th1、tc1细胞均不相关(p>0.05)。5初治chb患者外周血mdscs的百分比与alt及hbv-dna水平呈正相关,相关系数r分别为0.436与0.542,但与ast、tbil、dbil水平无相关关系(p>0.05)。mdscs的两种亚型,g-mdscs、m-mdscs与alt、ast、tbil、dbil及hbv-dna水平均不相关(p>0.05);比较hbeag(+)与hbeag(-)组间mdscs及其亚型的频数,发现hbeag(+)的chb初治患者中mdscs比例[(1.36±0.79)%]高于hbeag(-)组[(0.82±0.59)%],g-mdscs与m-mdscs所占百分比略高于hbeag(-)组,然而差异均无统计学意义(p>0.05)。6与健康对照者相比,chb患者外周血中il-10的水平明显升高[病例组vs对照组:(7.00vs5.43)pg/ml],而tgf-β1[病例组vs对照组:(185.6vs298.67)pg/ml]与ifn-γ[病例组vs对照组:(31.84vs47.16)pg/ml]的水平明显降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。7chb患者外周血中il-10、tgf-β1、ifn-γ的表达水平与mdscs及其两种亚型的频数间均无相关关系(p>0.05)。8chb患者外周血中il-10的表达与alt、ast、tbil、dbil及hbv-dna水平均呈正相关,相关系数r分别为0.487、0.757、0.487、0.486、0.664;然而,tgf-β1及ifn-γ与alt、ast、tbil、dbil及hbv-dna水平均无相关关系(p>0.05)。9多元线性回归模型结果显示,在初治chb患者中,hbv-dna与th1细胞水平为影响mdscs表达的主要相关因素(p<0.05)。结论:1与健康对照者相比,chb患者外周血中mdscs比例明显升高,其中g-mdscs所占比例升高,而m-mdscs无明显变化,treg细胞所占百分比也明显升高,而th1、tc1细胞的频数在两组间无明显差异,提示mdscs与treg细胞可能共同参与chb患者的免疫耐受过程,hbv持续感染可导致免疫抑制性成分水平上调,影响机体的抗病毒应答反应。2与健康对照者相比,chb患者外周血中il-10的水平明显升高,且与病情密切相关,提示mdscs可能通过产生il-10发挥免疫抑制作用,促进免疫逃逸,导致慢性化。3抗病毒(恩替卡韦)治疗后,chb患者mdscs水平无明显改变,提示抗病毒治疗可有效抑制病毒复制,改善炎症症状,但对mdscs表达无影响。4chb患者外周血mdscs与th1细胞呈负相关,但与treg、tc1细胞无明显相关关系,提示在慢性乙型肝炎中,mdscs可能主要通过抑制th1细胞的功能来发挥其免疫抑制作用。5chb患者外周血mdscs的表达与alt、hbv-dna水平呈正相关,表明mdscs参与chb疾病进展,若靶向消除mdscs,可能为chb的临床免疫治疗提供新方法。