目的:1.研究肉苁蓉苯乙醇总苷对正常人皮黑色素细胞的生物学作用（细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量、细胞周期和细胞凋亡等）,并考察其对黑素合成相关基因转录水平和蛋白表达情况的影响。2.建立UVB辐射诱导色素沉着人皮黑色素细胞模型,考察UVB辐射对人皮黑色素细胞的影响。3.评价肉苁蓉苯乙醇总苷对UVB辐射诱导致色素沉着人皮黑色素细胞模型的作用,并探讨其抗色素沉着的作用机制。4.考察10种苯乙醇苷单体对人皮黑色素细胞中黑素含量的影响,初步推断苯乙醇苷类化学成分抗色素沉着的构效关系。方法:以原代人皮黑色素细胞为模型载体,采用MTT法测定细胞增殖、L-DOPA法检测酪氨酸酶活性、NaOH裂解法测定黑素含量、Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率、PI单染法分析细胞周期、RT-PCR法测定黑素合成过程中相关基因（MITF mRNA、TYR mRNA、TRP-1 mRNA、TRP-2mRNA）的转录水平、Western-blot法检测TYR、TRP-1、TRP-2和MITF蛋白表达的情况。结果:1.肉苁蓉苯乙醇总苷对正常人皮黑色素细胞的增殖有一定抑制作用,高剂量组干预48 h后细胞活力仍在80%以上,表明肉苁蓉苯乙醇总苷对正常人皮黑色素细胞的细胞毒性很小;相同剂量下对酪氨酸酶的抑制作用优于熊果苷阳性对照组,对黑素颗粒含量的降低两者作用相当;细胞周期测定结果表明,肉苁蓉苯乙醇总苷主要通过调节G₁/S的转换,来促进细胞凋亡的发生;此外,肉苁蓉苯乙醇总苷可以显著下调相关基因的转录水平,并可降低相关蛋白的表达。2.UVB辐射结果显示,0.4 J/cm²以下的UVB辐射强度可促进黑色素细胞的增殖,其中以0.3 J/cm²辐射强度48 h模型组的细胞增殖率最高,与空白对照组（无UVB照射组）比较有显著差异（P<0.01）;0.4 J/cm²辐射强度以上各模型组细胞损伤明显,细胞发生皱缩、破裂,增殖率下降;在0.1⁰.4 J/cm²辐射强度范围内,细胞中酪氨酸酶活性和黑素颗粒含量明显提高,其中均以0.3 J/cm²辐射强度模型组的作用最为明显,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）,同时0.3 J/cm² UVB干预后能显著上调细胞中黑素合成相关基因MITFmRNA、TYRmRNA、TRP-1mRNA、TRP-2 mRNA的表达水平。3.肉苁蓉苯乙醇总苷能够有效抑制UVB辐射致黑素沉着人皮黑色素细胞模型中酪氨酸酶活性及减少黑素颗粒含量,显著下调黑素合成相关基因TYR、TRP-1和MITF mRNA转录水平,并可降低TYR、TRP-1、TRP-2和MITF的蛋白表达;细胞凋亡的检测结果则表明,低、中、高不同浓度的肉苁蓉苯乙醇总苷干预组与空白对照组比较细胞凋亡率无统计学差异,提示药物在有效抑制UVB辐射至黑素含量增加的同时并不影响黑色素细胞的正常生长。4.10种苯乙醇苷对人皮黑色素细胞的IC₅₀在650¹200μg/mL范围内,表明苯乙醇苷安全性较高,选取400μg/mL的药物进行干预,细胞存活率接近或超过80%,提示在此浓度条件下苯乙醇苷的细胞毒性很小;400μg/mL的药物干预后,人皮黑色素细胞中黑素颗粒的含量均显著降低,其中金石蚕苷、毛蕊花糖苷、橄榄苦苷、2’-乙酰基毛蕊花糖苷及木通苯乙醇苷B降低黑素颗粒含量的活性优于阳性对照熊果苷组（P<0.01）;松果菊苷、异毛蕊花糖苷、红景天苷与阳性熊果苷组活性相当,连翘酯苷A和连翘酯苷B与空白对照组比较具有降低黑素颗粒含量活性（P<0.01）,但弱于熊果苷组（P<0.01）。结论:肉苁蓉苯乙醇总苷可显著降低人皮黑色素细胞中酪氨酸酶的活性及黑素颗粒的含量,并可在分子水平上下调黑素合成过程中相关基因的转录水平和蛋白的表达情况,从而表现出明显的抑制人皮黑色素细胞黑素合成的作用。在降低黑素合成的同时,肉苁蓉苯乙醇总苷对人皮黑色素细胞的正常生长无明显影响,显示出较高的安全性。本研究从细胞和分子层面进一步明确了肉苁蓉苯乙醇总苷的抗色素沉着作用,探讨了其可能的作用机制,为将肉苁蓉苯乙醇苷作为功效成分开发为抗色素沉着新药、新制剂或功能性化妆品奠定了理论基础。其确切的功效和安全性还受所制备的制剂中其它辅料和载体的影响,故尚须进行动物活体实验和人体皮肤试验。在明确了肉苁蓉苯乙醇总苷的抗皮肤色素沉着作用及其作用机制的基础上,本研究又考察10种苯乙醇苷单体对人皮黑色素细胞黑素合成的影响,分析苯乙醇苷单体的化学结构与抑制黑素合成作用之间的关联,初步推断了苯乙醇苷类化学成分抗色素沉着的构效关系,有利于发现新的抑制皮肤色素沉着药物,或为化学合成提供先导化合物,从而研制出具有自主知识产权的新药。