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目的:肾小管上皮细胞损伤是肾脏纤维化及终末期肾脏病的重要病理学基础,当前研究认为,线粒体ROS/Nlrp3炎症小体轴激活能够直接介导肾小管上皮细胞损伤。线粒体自噬作为线粒体质量控制的重要途径广泛参与了多种肾脏疾病的调控,但目前其具体分子机制尚不十分清楚。抗增殖蛋白Prohibitin 2(PHB2)是一种与维持线粒体形态和功能密切相关的线粒体内膜蛋白,最新研究显示PHB2能够结合自噬相关蛋白LC3,介导线粒体自噬选择性地清除受损线粒体。本研究探讨了线粒体自噬在ANG II诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用,探究了PHB2对线粒体/Nlrp3炎症小体通路的调控作用,以期为慢性肾脏病的治疗提供新的靶点和理论依据。方法:第一部分:体外培养肾小管上皮细胞HK-2,分别以不同浓度梯度的ANGⅡ(10-8,10-7,10-66 and 10-55 mol/L)刺激HK-2细胞12h,免疫印迹法观察自噬相关蛋白LC3、ATG7表达水平的变化;使用50uM氯喹预处理后再以ANGⅡ干预细胞,免疫印迹法检测LC3I、LC3II、SQSTM1,TOMM20的表达水平,从而进一步验证细胞内自噬流的变化。构建ANGⅡ诱导的肾小管上皮细胞损伤模型,分别以自噬抑制剂3MA及自噬诱导剂雷帕霉素干预细胞,采用tunel及CCK8法观察自噬对细胞凋亡及增殖活性的影响;第二部分:用不同浓度ANGⅡ(10-8,10-7,10-66 and 10-55 mol/L)刺激HK-2细胞,免疫印迹法观察ANGⅡ诱导后细胞内PHB2表达水平变化;使用shRNA敲除细胞内PHB2蛋白,线粒体探针MitoTracker及溶酶体探针LysoTracker共染,共聚焦显微镜观察线粒体自噬情况,tunel法检测细胞凋亡;在HK-2细胞内过表达PHB2蛋白,免疫印迹法检测LC3I、LC3II、ATG7,TOMM20的表达水平,MitoTracker及LysoTracker共标检测线粒体自噬变化,tunel法观察细胞凋亡;第三部分:通过质粒转染分别在HK-2细胞内敲低、过表达PHB2蛋白,采用DCFDA染色、MitoSOX染色、JC-1染色、real-time PCR观察线粒体功能障碍相关指标;免疫印迹法检测NLRP3炎症小体激活及炎症因子IL-18、IL-1β表达水平的变化。结果:(1)ANGⅡ呈剂量依赖诱导肾小管上皮细胞自噬;(2)增强自噬减轻了ANGⅡ诱导的HK-2细胞损伤,而抑制自噬则加重损伤;(3)ANGⅡ可诱导细胞内PHB2表达水平上调;(4)PHB2敲低抑制线粒体自噬,加重了ANGⅡ诱导的线粒体功能障碍、NLRP3炎症小体激活及细胞凋亡;(5)PHB2过表达增强线粒体自噬,缓解了线粒体功能障碍,抑制炎症小体激活及细胞凋亡。结论:本研究发现自噬在ANGⅡ诱导的肾小管上皮细胞损伤中发挥保护作用,PHB2作为细胞内线粒体自噬受体,通过调节线粒体功能障碍/NLRP3炎症小体轴有效缓解了HK-2细胞损伤。