基于OPG和RANKL探讨六味地黄汤及其“补泻”药对干预绝经后骨质疏松模型大鼠的作用及其机制

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laofei
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目的:观察六味地黄汤及其3个“一补一泻”药对干预绝经后骨质疏松症(PMOP)模型大鼠及其股骨和肾脏中骨保护素(OPG)及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响,并比较六味地黄汤及“酒萸肉-丹皮”药对中莫诺苷的含量的差异,明确六味地黄汤干预PMOP的作用及其机制、药效成分以及组方规律,进而为六味地黄汤的临床用药提供实验依据,丰富六味地黄汤“补泻”药对配伍理论。方法:1.将3-4月龄SD大鼠随机分为假手术组、模型组、六味地黄汤组、酒萸肉-丹皮组、山药-茯苓组、熟地-泽泻组、阿仑膦酸钠组(阳性药物组)。除假手术组外,其余各组大鼠均采用摘除双侧卵巢的方法制备PMOP大鼠模型。造模后第16 d开始,各组按相应剂量连续灌胃给药90天,每周观察各组大鼠体重的变化,检测模型大鼠骨密度(BMD)值、血清雌二醇(E2)水平、血钙(Ca)及血磷(P)含量、碱性磷酸酶(ALP)及血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平。2.采用免疫组化法检测大鼠股骨成骨细胞和肾脏肾小管上皮细胞中OPG、RANKL蛋白的表达。3.采用高效液相色谱法(流动相为甲醇:水(24:76);体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长为236nm)测定六味地黄汤及其酒萸肉-丹皮组药对中莫诺苷成分的含量。结果:1.与模型组比较,六味地黄汤组可显著提高PMOP模型大鼠的BMD值,升高模型大鼠的E2水平(P<0.05),提高模型大鼠的血P、Ca含量(P<0.05),降低模型大鼠的TRAP、ALP水平(P<0.05);与六味地黄汤组比较,酒萸肉-丹皮药对组没有显著性差异(P>0.05),但实验数据略低于六味地黄汤组;山药-茯苓药对组及熟地-泽泻组有显著性差异(P<0.05)。2.与模型组比较,六味地黄汤组能上调股骨成骨细胞及肾脏肾小管上皮细胞中的OPG的蛋白表达、下调RANKL的蛋白表达(P<0.05);酒萸肉-丹皮药对仅能上调股骨成骨细胞中OPG的蛋白表达、下调RANKL的蛋白表达(P<0.05)。3.酒萸肉-丹皮药对中所含的莫诺苷浓度在0.480~7.680μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9993);平均回收率为102.79%,RSD值为1.73%;莫诺苷在六味地黄汤中含量为0.897%,在酒萸肉-丹皮药对中含量为0.780%。结论:1.六味地黄汤可升高血磷、血钙含量,降低血清ALP、TRAP水平,调节骨吸收和骨形成的骨代谢平衡,从而干预PMOP,且酒萸肉-丹皮药对为该方干预PMOP的主要药效组成部分之一。2.六味地黄汤干预PMOP的机制之一可能与其方中酒萸肉-丹皮药对调节股骨中的OPG及RANKL的蛋白表达有关。3.六味地黄汤中莫诺苷的含量较酒萸肉-丹皮药对略有增加,这可能是六味地黄汤全方干预PMOP的作用要优于酒萸肉-丹皮药对的原因之一。
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