本实验室前期,以HL-CMS不育系YTA为材料,克隆并鉴定了一个6.7 kb的HL-CMS相关线粒体序列HL-sp1,根据序列预测含2个orfs,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。本文以构建的转基因水稻超表达orf290对育性的影响,分析了水稻线粒体基因orf290的功能,主要结果如下:1.利用YTA为材料克隆得到目的基因orf290,以MH63基因组DNA为模板利用巢式PCR扩增得到线粒体信号肽Rf1b5’,利用植物双元表达载体pCAMBIA1305.1构建了含有线粒体信号肽(35S::Rf1b5’::orf290)和不含线粒体信号肽(35S::orf290)的超表达载体,以YTB为受体,通过农杆菌介导完成遗传转化,获得超表达转基因阳性植株。2.以YTA和YTB分别为阴性及阳性对照,对35S::Rf1b5’::orf290转基因植株花粉可育度和套袋结实率进行统计分析,结果表明除个别植株花粉可育度几乎为0外,所有其它转基因植株花粉可育度均在30%以下,套袋结实率在50%左右。实验证实线粒体基因orf290与水稻细胞质雄性不育相关。3.以水稻的单拷贝基因蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为内源参照基因,以潮霉素抗性基因(hpt)作为目的检测基因,基于实时荧光定量PCR鉴定35S::Rf1b5’::orf290转基因植株中外源基因的拷贝数。结果显示有2株为单拷贝,以单拷贝植株的相对表达量为1,其它转基因植株的表达量除个别植株外均上调。4.克隆并比较分析了z616、z604和z597三个与YTB回交后代育性不同的L-orf290材料与YTA中orf290的DNA序列和cDNA序列,结果显示这三种材料在orf290并没有序列差异,至于ORF的上下游序列是否有差异还有待进一步研究。