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第一部分STAT1在正常宫颈组织,宫颈癌前病变以及不同分期宫颈癌中的表达。目的:探讨STAT1在正常宫颈组织,宫颈癌前病变以及不同分期宫颈癌中的表达。方法:采用免疫组织化学方法(SABC法)检测1例正常宫颈组织,11例宫颈癌前病变组织,28例宫颈癌组织(包括16例Ⅰ期宫颈癌组织,12例Ⅱ期宫颈癌组织)中STAT1表达情况。结果:STAT1在正常组织中未见明显表达,在宫颈癌前病变组织中异型细胞中有部分表达,在宫颈癌组织中异型细胞和周围组织均看见表达,STAT1在宫颈癌组织中的表达阳性率高于正常组织和癌前病变组织(P<0.05)。结论:STAT1阳性表达与宫颈癌的发生发展相关。第二部分短发卡RNA沉默宫颈癌Hela细胞株STAT1基因目的:运用短发卡RNA(shRNA)干扰技术沉默宫颈癌Hela细胞株STAT1基因,并建立稳定转染细胞株。方法:经脂质体介导将STAT1-shRNA表达载体转染入Hela细胞。转染细胞经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。应用半定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后Hela细胞中STAT1在mRNA以及蛋白水平的表达情况。结果:STAT1-shRNA表达载体成功转染入Hela细胞。转染后Hela细胞中STAT1在mRNA以及蛋白水平的表达的表达水平较转染前明显降低(P<0.05)。结论:STAT1-shRNA表达载体有效抑制宫颈癌Hela细胞株中STAT1的表达,成功建立稳定转染STAT1-shRNA真核表达载体细胞株STAT1-shRNA-Hela及稳定转染空质粒细胞株Mock-Hela,为后续实验奠定基础。【第三部分RNA干扰靶向沉默STAT1后Hela细胞株生物学行为的研究目的:探讨RNAi靶向沉默STAT1后Hela细胞株增殖,侵袭,迁移能力等生物学行为的变化。方法:运用MTT法检测稳定转染STAT1-shRNA真核表达载体前后宫颈癌Hela细胞的增殖水平,运用Transwell小室法检测其迁移和侵袭能力的变化。结果:(1)实验组(稳定转染STAT1- shRNA真核表达载体的细胞株STAT1-shRNA-Hela)与转染试剂组(稳定转染空质粒细胞株Mock-Hela)空白对照组(Hela细胞)相比较,其增殖水平于培养第7天开始有统计学差异,实验组细胞增殖水平增高(P<0.05)。(2)体外迁移实验中,实验组穿膜细胞数为(25.66±1.15)个,转染试剂对照组穿膜细胞数为(18.33±1.52)个,空白对照组穿膜细胞数为(16±1)个。实验组穿膜细胞数多于对照组(P<0.05),对照组间无统计学差异(P>0.05)。(3)体外侵袭实验中,实验组穿膜细胞数为(10±1)个,转染试剂对照组穿膜细胞数为(5.33±0.58)个,空白对照组穿膜细胞数为(4±1)个。实验组穿膜细胞数多于对照组(P<0.05),对照组间无统计学差异(P>0.05)。结论:靶向STAT1基因的shRNA能够促进Hela细胞增殖,增强Hela细胞的迁移侵袭能力。STAT1可能是宫颈癌潜在的抑癌基因。