【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨m TOR/AKT/Ca2+信号通路在T-2毒素诱导的小鼠睾丸间质细胞（TM3）凋亡过程中的作用机制。方法:本研究以TM3细胞为研究对象,用T-2毒素（100n M）作用不同时间（0h、12h、24h、48h）后进行以下试验:（1）T-2毒素对TM3细胞活力及凋亡的影响:用T-2毒素（100n M）作用TM3细胞不同时间（0h、12h、24h、48h）,使用MTT法检测细胞活率
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目的:本研究旨在探讨m TOR/AKT/Ca2+信号通路在T-2毒素诱导的小鼠睾丸间质细胞（TM3）凋亡过程中的作用机制。方法:本研究以TM3细胞为研究对象,用T-2毒素（100n M）作用不同时间（0h、12h、24h、48h）后进行以下试验:（1）T-2毒素对TM3细胞活力及凋亡的影响:用T-2毒素（100n M）作用TM3细胞不同时间（0h、12h、24h、48h）,使用MTT法检测细胞活率;流式细胞仪检测TM3细胞的凋亡率;Western Blot方法检测细胞中caspase-3蛋白的表达。（2）T-2毒素对m TOR/AKT/Ca2+信号通路的影响:T-2毒素作用细胞不同时间（0h、12h、24h、48h）,Western Blot检测m TOR/AKT通路相关蛋白m TOR、p-m TOR ser2481、p-m TOR ser2448、AKT、p-AKT ser473的表达;用Ca2+指示剂Fuar 2-AM对细胞进行染色,荧光显微镜和荧光酶标仪检测细胞中游离Ca2+浓度的变化。（3）m TOR/AKT/Ca2+在T-2毒素诱导TM3细胞凋亡中的作用机制:BAPTA-AM（钙离子螯合剂）预处理TM3细胞30min,T-2毒素作用细胞24h后,荧光酶标仪检测细胞内游离Ca2+浓度,流式细胞仪检测TM3细胞的凋亡率,Western Blot方法检测细胞中caspase-3蛋白的表达;m TOR激活剂MHY1485预处理TM3细胞30min,T-2毒素作用细胞24h后,Western Blot方法检测蛋白m TOR、p-m TOR ser2481、p-m TOR ser2448、AKT、p-AKT ser473的表达;检测细胞中游离的Ca2+浓度;流式细胞仪检测TM3细胞凋亡率。结果:（1）随着T-2毒素作用时间的增加,TM3细胞活率呈时间依赖性降低;Cleaved-caspase-3的表达呈时间依赖性增加;细胞凋亡率呈时间依赖性升高。（2）随着T-2毒素作用时间的增加,极显著降低TM3细胞内p-m TOR ser2481/m TOR、p-m TOR ser2448/m TOR、p-AKT ser473/AKT的比值,抑制了m TOR/AKT信号通路的激活;呈时间依赖性的极显著升高了TM3细胞内游离Ca2+浓度。（3）添加BAPTA-AM（钙离子螯合剂）,极显著降低了T-2毒素引起的TM3细胞中Ca2+浓度升高,同时极显著降低了T-2毒素引发的Cleaved-caspase-3的表达增加以及TM3细胞凋亡;添加MHY1485（m TOR激活剂）后,显著增加了p-m TOR ser2481/m TOR、p-m TOR ser2448/m TOR、p-AKT ser473/AKT的比值,缓解了T-2毒素对m TOR/AKT信号通路的抑制,降低了T-2毒素引起的细胞内游离Ca2+浓度的增加和TM3细胞凋亡。结论:T-2毒素通过抑制m TOR/AKT信号通路,上调细胞内Ca2+含量,进而诱导TM3细胞凋亡。
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