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手性是自然界的本质属性之一。许多与生命活动密切相关的氨基酸、肽、蛋白质等具有生物活性的物质均具有一个或多个手性中心。由于对称性和光学活性的不同,不同对映异构体在生命体内表现出不同的生理活性,它们在体内的分布变化和代谢与某些疾病的形成密切相关。因此,对映体的分离和测定,在生命科学及其它相关领域均具有重要意义。本文采用柱前衍生化反相高效液相色谱(HPLC)分析技术,对天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、鱆胺(OA)对映体进行了手性拆分研究,建立了生物样品中D-氨基酸和(R)-OA的测定方法,并已应用于小鼠脑组织中D-氨基酸和蜜蜂脑组织中(R)-OA的测定,同时对几种D-氨基酸与帕金森疾病的相关性进行了初步探讨。论文的研究工作主要包括以下三方面:1.建立了测定生物样品中微量D-Asp、D-Glu的HPLC法。以邻苯二甲醛—N-异丁酰基-L-半胱氨酸(OPA-IBLC)柱前衍生。醋酸钠-甲醇-乙腈混合液为流动相,采用梯度淋洗技术,2种氨基酸对映体在40 min内完全分离。以荧光检测,D-Asp、D-Glu的浓度在10～1000 nmol/L时,其浓度与峰面积呈良好线性关系,当信噪比为3(S/N=3)时,D-Asp和D-Glu的检出限分别为2.0 nmol/L、1.0 nmol/L。首次对帕金森疾病(PD)模型小鼠中脑D-Asp和D-Glu含量变化进行了测定,结果发现对照组与模型组中脑D-Asp含量无显著性差异,而D-Glu含量呈现显著性差异。推测在中脑组织里,内源性的D-Asp的合成及转运不受神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)的毒害仍保持原有的动态平衡,而D-Glu可能具备与L型对映体相似的兴奋毒性,参与PD的发病机制。2.采用邻苯二甲醛—N-异丁酰基-D-半胱氨酸(OPA-IBDC)为手性衍生试剂,甲醇-乙腈-醋酸钠混合液为流动相,在C18柱上拆分了D.L-Ser对映体。分别考察了流动相组成、流速和柱温等对分离的影响,确立了最佳分离条件,其分离度达到2.74。D-Ser浓度在30～6000 nmol/L范围内,与峰面积呈良好线性关系。将方法运用于PD模型小鼠中脑及大脑皮质中D-Ser含量的测定,结果表明,模型组脑组织中D-Ser的含量与对照组相比,整体呈明显下降趋势,推测D-Ser可能参与了PD的病理生理过程。3.建立了一种适合蜜蜂脑组织中(R)-OA测定的方法。以邻苯二甲醛—N-乙酰基-半胱氨酸(OPA-NAC)为手性衍生试剂,采用HPLC技术,对OA对映体衍生物的手性分离进行了详细研究。优化了衍生条件和分离条件,研究了介质pH,衍生试剂用量、反应时间、流动相组成、柱温、流速等对分离选择性的影响。在确立的最佳分离条件下,OA对映体衍生物在30min内得到较好的分离,分离度为2.28。将方法运用于蜜蜂脑组织中(R)-OA含量的测定,灵敏度高,重现性好,操作简便,结果可靠。