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目的:肝癌是严重威胁人类健康的重大疾病之一,发病率列恶性肿瘤第六位,由于其预后不良,病死率位居第三。每年全球约66.2万人死于肝癌[1]。原发性肝癌中90%以上为肝细胞癌[2-8]。肝癌具有明显的地理分布,中国是高发病率的国家,实际发病率可能高达39/100000人[1]。全球每年新增的肝癌病例40%来自中国[8]。虽然早期发现的患者术后5年生存率可达75%～80%,但50%的肝癌确诊时已属晚期[9],并且尚无有效的治疗提供给这些晚期病例。目前肝细胞癌无创性诊断主要依靠影像学检查及血清甲种胎儿球蛋白定量检测,而血清甲种胎儿球蛋白的敏感性、特异性均不令人满意[10],容易漏诊和误诊。近年的研究发现磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylino-sitol-3 kinase/serine/threonine kinase/ mammalian target of rapamycin,PI3K/Akt/mTOR)信号转导通路与肝细胞癌的发生与发展关系密切,具有调节细胞凋亡、促血管新生、肿瘤转移、扩散等功能[11]。相关的酪氨酸激酶受体2(endothelium-specific receptor tyrosine kinase-2,Tie-2)主要在血管内皮细胞表达的一种酪氨酸激酶受体,与配体血管生成素,共同调节血管新生、成熟稳定或重塑,Tie-2是激活PI3K/Akt/ mTOR信号转导通路因子之一。可溶性酪氨酸激酶受体2(soluble endothelium-specific receptortyrosine kinase-2,sTie-2)是Tie-2的细胞外域蛋白裂解产物,佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)能够激发sTie-2从血管内皮细胞脱落[12-14]。虽然sTie-2的作用并不完全清楚,但在肾癌、头颈癌及膀胱癌的研究中发现,血清sTie-2含量与疾病分期和病死率有相关性[15-17]。然而早期肝癌血清sTie-2的表达尚未见研究报告。本实验通过检测血清sTie-2的含量,研究sTie-2表达与早期肝细胞癌的相关性,旨在寻找肝细胞癌早期诊断的新方法。方法:1实验动物75只SPF(specific pathogen-free)级雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠。2分组及动物模型的建立[18-21]实验动物随机分为4组。对照组(n=10):按0.2ml/100g体质量给予橄榄油溶液腹腔内注射,2次/周,连续6周。实验组A肝脏损伤模型(n=10):按0.2ml/100g体质量给予50%四氯化碳橄榄油溶液腹腔内注射,2次/周。按1ml/100g体质量给予30%食用白酒灌胃,3次/周,仅1周。实验组B肝硬化模型(n=15):按0.2ml/100g体质量给予50%四氯化碳橄榄油溶液腹腔内注射,2次/周。按1ml/100g体质量给予30%食用白酒灌胃,3次/周,连续15周。实验组C肝细胞癌模型(n=40):按0.2ml/100g体质量给予50%四氯化碳橄榄油溶液腹腔内注射,2次/周。按1ml/100g体质量给予30%食用白酒灌胃,3次/周,连续23周。3大体观察每日随时观察动物的毛色、饮食、粪便及活动情况,记录体重及饮水量。4血清标本采集采用断尾取血,每只1ml,取血后室温凝固30min,4℃离心(1000rpm)10min,收集血清,-70℃冷冻保存备测。取血时间:对照组第7w第1d;实验组A第2w第1d;实验组B第16w第1d;实验组C第24w第1d。5肝脏组织标本采集取血后处死实验动物,立即剖腹检查,观察肝脏大小、色泽、质地,取疑似病理肝组织,并浸入10%福尔马林液中固定。6血清标本检测采用夹心法酶联免疫吸附法(Sandwich enzyme linked immuno sorbent assay,sELISA),检测血清标本中sTie-2含量。7肝标本组织学检查对所取组织常规行10%福尔马林固定、石蜡包埋4um连续切片,每例收集3-5张,苏木精-伊红(HE)染色,进行组织病理学评估,明确诊断。8统计学分析应用SPSS 11.0统计软件,进行统计学分析。各组表达结果,以近似正态分布,定量?x±s表示。各组样本均数之间比较采用单因素方差分析,差异以P<0.05作为具有统计学意义的标准。结果:1各组血清sTie-2含量对照组为62.123ng/ml±6.06(7s),肝损伤组为58.836ng/ml±6.921(s),肝硬化组为40.858ng /ml±12.585(s),肝细胞癌组为31.025ng/ml±16.103(s)。2各组血清sTie-2含量比较肝细胞癌组和肝硬化组与对照组及肝损伤组比较,血清sTie-2表达差异有显著性(F=16.060,P=0.000)。肝细胞癌组与肝硬化组比较,血清sTie-2表达差异无显著性(P=0.060)。对照组与肝损伤组比较,血清sTie-2表达差异无显著性(P=0.519)。3模型制作成功例数实验组A:10/10;实验组B:10/15;实验组C:6/40。结论:采用四氯化碳和食用白酒诱导的SD大鼠肝硬化和肝细胞癌模型及成功率,符合本实验要求,模拟人肝癌及肝硬化血清学与组织学研究。本实验结果显示sTie-2在肝硬化和肝癌模型中的表达差异无显著性(P=0.060)。表明sTie-2模拟人肝癌与肝硬化的诊断作用存在盲目性,sTie-2作为肝细胞癌早期诊断指标欠缺特异性。sTie-2作为血清学指标辅助影像学证据,对肝细胞癌的早期诊断可能会成为较为敏感的指标之一。