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心肌缺血性疾病,属于中医学“胸痹”“真心痛”“厥心痛”的范畴。随着人们生活水平的显著提高,心肌缺血性疾病已成为全世界发病率和死亡率均非常高的疾病之一,严重威胁人类的健康和生命。多年来,现代医学在阐明心肌缺血发病机制以及寻找有效的预防和治疗手段方面进行了大量的研究。迄今,除了经典的传统抗凝扩冠药,和后来发展的支架搭桥等外科手术外,其它防治心肌缺血性损伤的办法还是不多,至今该病的发病率和死亡率仍然高居不下。针灸作为一种简、便、验的预防和治疗手段,早在《黄帝内经》中就有关于针灸治疗“胸痹”,“心痛”的记载。大量的古代文献、临床经验以及现代研究均显示：针刺对缺血心肌具有较为确切的保护作用,如缓解冠心病病人心绞痛、胸闷等临床症状,改善ECG-ST-T及左心功能等等。因此,找到关于针刺如何发挥改善心肌缺血性损伤作用的途径,具有重要的临床意义和价值,同时将有助于为针刺改善冠心病心肌缺血性疾病提供科学基础。研究证明,急性心肌缺血时,交感神经及心脏-肾上腺素受体过度激活,导致细胞内钙超载,从而引起心肌缺血性损伤。过去有关针灸方面的研究显示：针刺效应可通过影响交感神经系统的兴奋性而来发挥改善心肌缺血性损伤的作用。众所周知,交感神经的主要靶受体是p-肾上腺素能受体(β-AR),同时,β-AR也是心脏中最重要的受体,故交感神经对心脏的调节和控制作用主要是通过p-AR来完成的。由此可知,针刺效应的作用极有可能通过影响心脏交感神经系统,从而进一步作用于交感神经系统的靶受体p-肾上腺素能受体,最终起到改善缺血性心肌损伤的作用。实验目的：本研究通过采用结扎冠状动脉左前降支的大鼠急性心肌缺血模型,以及小鼠游泳疲劳运动模型,来观察电针内关穴对缺血心肌的保护作用。进一步探讨p-AR介导电针内关穴改善缺血性心肌损伤的机制研究,为针刺防治心肌缺血性疾病提供临床指导意义以及理论基础。实验方法：1.第一部分实验：选用雄性成年Wistar大鼠32只,体重235±15g。将大鼠随机分为四组：正常组(NC组)、模型组(Model组)、电针组(EA组)和心得安组(EAP组),每组各8只。Model、EA和EAP组于麻醉后行冠脉结扎术,且全程记录Ⅱ导联心电图。NC组仅穿线,不做其他处理。EA组于每次麻醉后电针内关30min(电针参数：强度3mA,频率20Hz); EAP组于麻醉后先腹腔注射p-AR阻断剂——心得安(10mg/kg),15min后再电针“内关"30min,连续3天。通过观察大鼠心电图ST段幅值的变化、心律失常评分和心肌梗塞面积来明确电针“内关”穴改善缺血性心肌损伤的效应,并探讨p-AR是否参与介导了上述针刺效应。2.第二部分实验：选用野生型C57BL/6小鼠及与其同品系的β1/β2-AR双敲小鼠,各24只,雄性,体质量18-25g。C57BL/6小鼠随机分为三组：对照组(Control组)、游泳游泳疲劳组(疲劳组,Fatigue组)和电针组(EA组),每组各8只。Control组不给予任何处理；Fatigue组只给予游泳疲劳运动,不做其他处理；EA组将小鼠放入自制的黑色鼠套后电针双侧“内关”30min(电针参数：强度0.5mA,频率2Hz),连续7天。β1/β2-AR双敲小鼠的处理方法同上。本实验部分通过游泳疲劳运动模型来观察电针“内关”穴改善游泳疲劳诱发的心肌缺血效应,并引用β1/β2-AR敲除小鼠来进一步观察p-AR是否参与介导了电针“内关”穴改善缺血性心肌损伤的针刺效应。实验结果：1.p-肾上腺素能受体介导电针抗大鼠急性心肌缺血的机制研究1.1电针“内关”穴对急性心肌缺血大鼠心电图ST段幅值的影响大鼠急性心肌缺血造模前,NC、Model、EA和EAP组ST段幅值均正常,四组之间没有显著的统计学差异(P>0.05)。经3天干预后,除NC组与Baseline比较无明显变化外,Model组心电图ST段幅值有明显的抬高(P<0.01),说明造模较成功。EA组在经过3天的电针干预后其心电图ST段幅值基本接近于正常,与Model组比较有明显的降低(P<0.01),而EAP组在经过3天的电针干预后ST段幅值与Model组比较无统计学差异(P>0.05),与Baseline和EA组比较均有明显抬高(P<0.01)。1.2电针“内关”穴对急性心肌缺血大鼠心律失常评分的影响在急性心肌缺血造模前,NC、Model、EA和EAP组各组大鼠心律失常评分均为O。经3天干预后,除NC组与Baseline比较无变化外,Model组出现了明显的房性／室性心律失常(P<0.01)。而EA组经过3天的电针干预后,心律失常评分与Model组比较明显降低(P<0.05),而EAP组在经过3天的电针干预后心律失常评分与Model组比较无统计学差异(P>0.05),与Baseline和EA组比较均有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。1.3电针“内关”穴对急性心肌缺血大鼠心肌梗塞面积的影响造模前,各组大鼠心肌梗塞面积均为0。经过3天干预后,与NC组比较,Model组和EAP组心肌梗塞面积均明显增加(P<0.01)。在而经过3天电针干预后,EA组心肌梗塞面积明显低于与Model和EAP组(P<0.01)。2、β-肾上腺素能受体介导电针抗小鼠游泳疲劳的机制研究2.1电针“内关”穴对游泳疲劳C57BL/6小鼠各项指标的影响Control组在Baseline.干预第1天至第7天后心电图ST段幅值、心率和心律失常评分均未见明显的改变。游泳疲劳运动后,Fatigue组和EA组小鼠均出现心电图ST段幅值抬高、心率减慢和心律失常评分增加等急性心肌缺血的征象,各项指标与相应的Baseline比较,均有明显的统计学差异(P<0.01),经过7天的干预后,Fatigue组ST段幅值、心率和心律失常评分均没有变化,无统计学差异(P>0.05),而EA组在经过7天的电针“内关”穴干预后,上述指标除心率没有变化外,其他均基本接近于正常水平,与Fatigue组比较有明显的改善(P<0.01)。2.2电针“内关”穴对游泳疲劳β1/β2-AR敲除小鼠各项指标的影响Control组在Baseline、第1天至第7天后心电图ST段、心率和心律失常评分均未见明显的改变。游泳疲劳运动后,Fatigue组和EA组小鼠均出现心电图ST段幅值抬高、心率减慢和心律失常评分增加,与Baseline比较,均有明显的统计学差异(P<0.01),经过7天的干预后,EA组与Fatigue组比较,ST段幅值、心率和心律失常评分均没有变化,无统计学差异(P>0.05)。实验结论：电针“内关”穴可以有效地改善急性心肌缺血大鼠引起的心电图ST段幅值的抬高、心律失常评分增加和心肌梗塞面积的扩大；另一方面,电针“内关”穴亦可以改善由游泳疲劳小鼠诱发的心电图ST段幅值的异常抬高以及心律失常的发生。而电针干预前应用β-AR阻断剂或敲除β-AR后,电针干预改善心肌缺血的效应亦被阻断。以上结果表明：电针“内关”穴可以有效地改善心肌缺血征象,且β-AR参与介导了上述针刺效应。