论文部分内容阅读
目的：
探讨前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA和融合基因TMPRSS2:ERG亚型TlE4mRNA的定量检测联合诊断早期前列腺癌的价值。
方法：
1、根据Genbank中的PCA3mRNA的参考序列(AF1003907),设计上下游引物及MGB探针,建立探针法实时定量逆转录PCR的检测方法学,用相对定量的研究方法分析实验结果。尿液PCA3mRNA的含量经PSA mRNA校正后用PCA3 mRNA/PSA mRNA比值表示,采用2￣△Ct方法计算,△Ct=CtPCA3mRNA￣CtPSA mRNA。
2、根据Genbank中TMPRSS2mRNA/(NM_005656.2)ERGmRNA/(NM＿004449.3)序列,设计上下游引物及MGB探针,建立探针法实时定量逆转录PCR扩增融合基因TMPRSS2:ERG亚型TlE4mRNA的检测方法学,用相对定量的研究方法分析实验结果。尿液TlE4mRNA的含量经PSA mRNA校正后用TlE4mRNA/PSA mRNA比值表示,采用2￣△Ct方法计算,△Ct=Ct TlE4mRNA-CtPSAmRNA。
3、用建立的方法学对37例(年龄46～84岁,平均73±7岁)前列腺癌(PCa)患者和53例(年龄55～91岁,平均69±9岁)前列腺良性增生(BPH)患者前列腺按摩后尿液PCA3mRNA/PSAmRNA及TlE4mRNA/PSAmRNA比值进行检测。
4、分析尿液PCA3mRNA和TMPRSS2:ERG融合体亚型TlE4mRNA含量各自对PCa的诊断价值及其联合诊断价值。
结果：
1、成功建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测TlE4mRNA和PCA3mRNA的方法,扩增产物经测序分析也已证实为两片段的的特异性产物。
2、前列腺按摩后尿液TlE4mRNA/PSAmRNA及PCA3mRNA/PSAmRNA比值诊断PCa性能评价:尿液TlE4mRNA/PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.802(95％CI:0.709～0.895)。取0.007为截断值时,PCa组56.6％病例为阳性(30/53)；BPH组有5.4％为阳性(2/37),其诊断前列腺癌的敏感度(sensitivity)和特异度(specificity)为56.6％和94.6％,阳性预测值(PPV)为93.8％、阴性预测值(NPV)为60.3％、准确度为72.2％；PCA3mRNA/PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.646(95％CI:0.533～0.758)取0.001为截断值时,PCa组47.2％病例为阳性(25/53);BPH组有27.0％为阳性(10/37)；其诊断前列腺的敏感度和特异度分别为47.2％和73.0％,阳性预测值(PPV)为71.4％、阴性预测值(NPV)为49.1％、准确度为57.8％。
3、PCA3mRNA和TlE4mRNA两个指标联合诊断前列腺癌的结果:两指标联合检测的敏感度比PCA3mRNA和TlE4mRNA两个指标单项检测分别提高了33.9％和24.5％。
结论：
前列腺癌按摩后尿沉渣中可以检测到TMPRSS2:ERG亚型TlE4mRNA及PCA3mRNA,联合PCA3mRNA和TlE4mRNA两个指标定量检测,可以显著提高检出前列腺癌的敏感度。此联合检测方法可以用于早期的前列腺癌诊断。