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目的: 对竹节参乙酸乙酯(EtOAc)部位的化学成分进行分离纯化,并评价分离得到各单体化合物的抗炎活性。同时对竹节参药材进行化学组成的定性和定量分析,以期为阐明竹节参的化学多样性及其抗炎药效物质基础,以及为完善竹节参品质评价体系提供立论依据和数据支持。 方法: (1)通过系统性溶剂法、大孔吸附树脂、正反向硅胶和制备液相等分离法,结合核磁共振等,从竹节参EtOAc部位中分离和鉴定单体化合物。 (2)在“脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7细胞”的炎性模型中检测模型细胞中炎症介质一氧化氮(NO)和炎症因子白介素-6(IL-6)的释放量,评价各单体化合物对炎性巨噬细胞中NO和IL-6的释放抑制效果,并对其进行初步的抗炎构效关系分析。 (3)将通过HPLC法分析得到的图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件中,把上述化合物作为参照物,标定各个主要的色谱指纹峰,并通过各对应色谱信号峰比较不同产地中竹节参化学成分的相似性。 (4)选定竹节参皂苷IVa作为“一测多评”(QAMS)方法学的内参,建立人参皂苷Re、竹节参皂苷Ⅳ、三七皂苷R2、竹节参皂苷Ⅴ、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rg6、oleanic acid-α-L-arabinofuranosyl-(1→4)β-glucopyranoside与其之间的相对校正因子(fkm);用fkm计算上述成分的含量。同时比较QAMS法与外标法对上述成分的含量测定结果。 结果: (1)从竹节参EtOAc部位中共分离并鉴定了13个化合物,分别是:竹节参皂苷-1(化合物1)、20(R)-人参皂苷-Rg2(化合物2)、20(R)-人参皂苷-Rh1(化合物3)、(3R,9R,10R)-人参炔三醇(化合物4)、三七皂苷-R2(化合物5)、20(S)-人参皂苷-Rh1 (化合物6)、20(S)-人参皂苷-Rg2(化合物7)、人参皂苷-Rk3(化合物8)、人参皂苷-Rg6 (化合物9)、2α,3β-dihydroxy-olean-12-en-28-O-β-D-glucopyrauoside(化合物10)、人参皂苷-Rg1(化合物11)、oleanic acid-α-L-arabinofuranosyl-(1→4)β-glucopyranoside(化合物12)、人参皂苷-Rf(化合物13)。 (2)从抗炎活性评价的结果来看,除少数单体外,其他单体化合物均表现出一定程度的抗炎作用,其中化合物12对LPS刺激小鼠RAW264.7细胞产生炎症介质NO和炎症因子IL-6的抑制效果最显著,其IC50分别为36.58 μM和41.22 μM。 (3)本课题比较了湖北恩施、五峰,云南丽江,四川峨嵋,日本秋田县产的竹节参栽培品,以及湖北恩施竹节参野生品之间的化学相似性,在优化的色谱条件下,共发现29个共有峰,以此分析不同产地竹节参的化学组成,其相似度范围在0.559~0.894之间,6批来源不同竹节参样品在同一色谱条件下保留时间的RSD值在0.0%~0.9%之间,峰面积的RSD值2.8%~156.0%之间,说明各产地竹节参的化学组成相似,但含量相差很大。 (4)在各自线性范围内,竹节参皂苷IVa与人参皂苷Re、三七皂苷R2、竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳ、人参皂苷Rg6、人参皂苷Rk3、oleanic acid-α-L-arabinofuranosyl-(1→4)β-glucopyranoside之间的fkm分别为0.84、0.59、0.74、0.33、0.63、0.54、0.28;且在不同分析仪器下也具有较好重复性;不同分析仪器下,比较QAMS法与外标法的含量测定结果,两者之间没有明显差异。6批样品中各目标成分含量范围分别为6.81~27.92mg/g;1.63~13.80 mg/g;1.24~8.49 mg/g;20.51~115.55 mg/g;61.15~119.71 mg/g;0.20~1.55 mg/g;0.13~2.15 mg/g;4.24~14.28 mg/g。 结论: 以分离得到的化合物为基础,对其进行活性评价;比较不同产地竹节参之间的相似性,分析各产地竹节参之间的品质差异,同时将“一测多评”法运用于竹节参药材含量测定中。上述结合竹节参中化学成分的分离、纯化、鉴定及抗炎活性评价,以及对不同来源的竹节参药材中多化学成分的定性和定量分析的方法,能够较准确的对其进行品质评价。