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雌激素受体(ERα和ERβ)在女性和男性发育及生殖生理中发挥不可替代的作用。除此以外,ERs在骨密度的维持,心血管,中枢神经和免疫系统也发挥重要的作用。ERα和ERβ在许多种类的肿瘤的发生发展中也发挥重要作用。雌激素受体可以发生多种形式的翻译后修饰,例如磷酸化,泛素化和类泛素化,这些翻译后修饰可以影响雌激素受体的转录活性,蛋白的稳定性,蛋白的亚细胞定位以及蛋白之间的相互作用。在本研究中,发现RSRC1具有SUMOylation修饰的共调节因子的功能,对于深入了解ERβ的SUMOylation修饰调节提供了新的视角,并发现了关于SUMOylation修饰一种新的现象,即一个蛋白的SUMOylation修饰可以调节另一个蛋白的SUMOylation。 雌激素受体ER有两种亚型:ERα和ERβ。ER属于典型的核受体超家族成员,具有AF1结构域(转录激活结构域1),DBD结构域(DNA结合结构域)和AF2(转录激活结构域2)。ERβ可以被SUMO1修饰,其发生SUMOylation修饰的位点在其第4位赖氨酸。SUMO1可以和泛素竞争结合ERβ的第4位赖氨酸,从而抑制ERβ的泛素化。在乳腺癌细胞系中SUMO1修饰抑制ERβ介导的转录活性。然而,ERβ发生SUMOylation的分子机制还不清楚。 用酵母双杂交的方法以ERβ(131-324aa)包括ERβ的部分Hinge区以及整个DBD结构域为诱饵,从人乳腺文库筛选相互作用蛋白。结果筛选到RSRC1为ERβ相互作用蛋白。免疫共沉淀实验证实了RSRC1与ERβ的相互作用,且该相互作用是不依赖于雌激素的。内源免疫共沉淀实验说明两者的相互作用是生理条件下存在的。定位结果显示ERβ/RSRC1相互作用定位在ERβ的DBD结构域,RSRC1的coil-coil结构域。由于RSRC1已知功能较少,又用酵母双杂交实验筛选RSRC1相互作用蛋白,筛选到SUMO1,PIAS1和PIAS3是RSRC1相互作用蛋白。免疫共沉淀实验验证了PIAS1,PIAS3与RSRC1的相互作用,并确定PIAS1/RSRC1相互作用定位在RSRC1的RS结构域。RSRC1能够被SUMO1修饰,且PIAS1和PIAS3能够增强RSRC1的SUMOylation。RSRC1发生SUMO1修饰的位点在第196位和第230位赖氨酸,PIAS1和PIAS3是其E3酶。过表达RSRC1,ERβ SUMOylation修饰增强;相反,敲低RSRC1,ERβ SUMOylation修饰降低。RSRC1增强ERβ第4位赖氨酸SUMOylation修饰依赖ERβ/RSRC1相互作用及其自身的SUMOylation。PIAS1是ERβ发生SUMOylation修饰的E3酶,且与ERβ存在相互作用。RSRC1能够增强PIAS1与ERβ之间的相互作用。过表达RSRC1能够增强PIAS1与ERβ的相互作用;相反,敲低RSRC1能够降低PIAS1与ERβ的相互作用。过表达RSRC1抑制ERβ转录活性;相反,敲低RSRC1,ERβ介导的转录活性明显升高。与转录活性结果相一致的是,过表达RSRC1能够抑制ERβ下游基因PR的mRNA水平。综上所述,发现一个ERβSUMOylation修饰的共调节因子RSRC1,为进一步深入了解其调控机制奠定了一定的理论基础。