去骨瓣减压术对CD1小鼠行为学及正常脑组织随时间的影响

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目的:研究去骨瓣减压术对小鼠行为学及正常脑组织产生的影响,及随时间推移的变化。该实验对颅骨缺损病人的预后及行颅骨修补术的时间有一定的指导意义。方法:采用清洁级CD1小鼠45只,成年雄性,体重40g±5g,随机分为正常对照组和DC组;其中正常对照组15只,不作任何干预,正常饲养;DC组30只,只行去骨瓣减压术。每组各取固定5只于处理完成后1小时、24小时、7天、14天、21天、28天行神经行为学人工评分(Neurological Severity Scores,NNS);DC组干预前3天及干预后7天、14天、21天、28天行旷场实验;28天时行高架十字迷宫实验;28天时行巴恩斯迷宫实验。用干湿重法测定脑组织水分含量,DC组每个时间点另取3只,分别于每组处理完成后12小时、1天、3天、5天、7天用干湿重法测定脑组织水分含量处死取脑称湿重,放入65℃烤箱48小时后称干重。用免疫组化方法观察神经胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体和神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,Neu N)抗体在各组小鼠大脑皮层中的表达情况,两组每个时间点各取5只,于干预完成后7天、14天、28天处死灌注取脑,进行免疫组化试验。用病理图文分析系统图像处理软件image Image-Pro plus 6.0分析图像,所得数据用SPSS 21.0软件进行统计学分析,观察脑组织的变化。结果:1各组小鼠一般情况正常对照组:小鼠进食水及精神状况良好,动作灵活,随饲养时间延长体重逐渐增加。DC组:小鼠麻醉清醒后基本正常,个别表现嗜睡。术后2周动作灵活度较前稍差,食欲及精神较正常对照组稍差。2行为学试验2.1神经行为学评分DC组与正常对照组整体比较,存在统计学差异(F=35.799,P<0.05),DC组得分较高。DC组随时间评分均值逐渐降低,21d时降至最低点,28d时较其稍增高。2.2矿场试验平均速度:平均速度随时间变化逐渐降低。中央区活动时间:中央区活动时间随时间逐渐降低。周边区活动时间:DC组7d、14d值低于干预前,21d、28d高于干预前。2.3高架十字迷宫进臂总次数:两组之间无统计学差异,均值比较DC组>对照组。开臂进入次数:两组之间无统计学差异。闭臂进入次数:两组之间无统计学差异,均值比较DC组>对照组。2.4巴恩斯迷宫试验两组比较错误总数,无统计学差异;两组比较找到目标盒所需时间,无统计学差异;均值比较为DC组>对照组。3干湿称重法分析时间因素:DC组均值曲线左右两侧均呈单峰状,1d时水分含量最高。左右对比:将DC组同只小鼠的左右两侧脑组织水含量对比,存在统计学差异(F=26.701,P<0.05),左侧显著高于右侧。4免疫组化神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP):比较DC组与对照组阳性细胞表达数,两者存在统计学差异(F=243.408,P﹤0.05),DC组高于对照组。DC组在28d时值最高,7d次之,均高于对照组与14d时。神经元核抗原(Neu N):比较DC组与对照组阳性细胞表达数,两者存在统计学差异(F=46.361,P﹤0.05),DC组低于对照组。DC组均值比较7d>14d>28d,低于对照组。结论:1去骨瓣减压术对小鼠的认知能力和运动能力产生损伤,21d有所减轻,但28d又出现损伤加重。2去骨瓣减压术不会导致小鼠呈明显焦虑状态或空间记忆力受损。3去骨瓣减压术导致小鼠脑水肿,1d水肿程度达到峰值。4手术应激对小鼠脑造成一定的炎症反应,但14d已基本消除,随着时间延长,炎症反应再次出现并加重,DC组GFAP阳性细胞表达数:28d>7d>14d。5 DC组神经元死亡数随时间延长逐渐增加。
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