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转基因水稻BPL9K是本课题组培育的转基因水稻新品系。本研究以转基因水稻BPL9K为实验材料,获得了其所有转化体的外源基因旁侧序列,并根据旁侧序列信息建立了不同转化体的事件特异性PCR检测方法。同时对转基因水稻中外源基因的遗传稳定性、表达稳定性和相关农艺性状进行了检测。本研究的主要结论如下: 1.对转基因水稻中外源基因进行分子鉴定,结果显示外源基因PhyLf和Bar均已成功整合到水稻基因组中,并稳定遗传。转基因水稻BPL9K-1中外源基因是双拷贝,BPL9K-2、BPL9K-4中外源基因是单拷贝。 2.采用hiTAIL-PCR等方法获得了转基因水稻BPL9K中外源基因的左右旁侧序列。三个转化体的外源基因均插入在基因组的非编码区,转基因水稻BPL9K-1两个拷贝的外源基因插入在水稻基因组的两条不同染色体上,由于插入和整合,T-DNA边界在两处均有不同程度的核苷酸残基缺失。转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入在水稻基因组第10号染色体短臂上,左边界插入在1037765位核苷酸残基之后,右边界插入在1037825位核苷酸残基之前,由于外源基因的插入和整合,T-DNA左边界缺失49bp、右边界缺失32bp,水稻第10号染色体上缺失59bp。转基因水稻BPL9K-4的外源基因插入在水稻基因组某染色体长臂上,由于外源基因的插入和整合,T-DNA左边界和右边界以及该染色体上均有不同程度的核苷酸残基缺失。基于各转化体的左右旁侧序列信息,分别建立了不同转化体的事件特异性定性PCR检测方法和检测外源基因纯杂合性的三引物PCR检测方法。这些方法的建立为转基因水稻BPL9K的利用和安全监管提供了技术支持。 3.转基因水稻BPL9K不同转化体的植酸酶活性存在极显著差异。BPL9K-1植酸酶活性最高,平均为28.82U/g;BPL9K-4次之,平均为25.77U/g;BPL9K-2最低,平均为17.11U/g。同一转化体的纯合体与杂合体的植酸酶活性不存在显著差异,植酸酶基因完全显性表达。植酸酶基因的表达显著受栽培条件和遗传背景的影响。种子经较长时间的常温储存后仍能保持较高的植酸酶活性,具有良好的应用前景。 4.使用ELISA试剂盒检测转基因水稻BPL9K叶片中PAT蛋白含量。BPL9K-2叶片中的PAT蛋白含量显著低于BPL9K-1与BPL9K-4,平均为43.89μg/g;BPL9K-1与BPL9K-4叶片中的PAT蛋白含量无显著差别,分别为53.68μg/g和50.22μg/g。尽管如此,三者的草铵膦抗性并无显著差别,均能耐受4g/L(1.528g/m2)的除草剂处理,是推荐剂量中量(0.15g/m2)的10.2倍。 5.对转基因水稻进行农艺性状考察和相关性状分析,发现尽管转基因水稻BPL9K的播始历期和生育期延长,BPL9K-1的株高变矮,但转基因水稻BPL9K的穗长、单株有效分蘖数、结实率、千粒重、单株产量等重要农艺性状和种子发芽率均未发生显著改变。