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目的:本实验在巴什拜羊和盘羊杂交羊SP-A基因表达和纯化的基础上,研究重组SP-A蛋白（rSP-A）对体外培养的绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）增殖、代谢的影响,对MO黏附作用的影响,以及对嗜酸性粒细胞（EOS）杀伤MO作用的影响。为研究rSP-A的体外生物学功能奠定基础。方法:（1）SP-A基因的表达及蛋白纯化:利用已构建好的巴什拜羊和盘羊杂交羊重组巴斯德毕赤酵母GS115/pPIC9K-SP-A阳性克隆株,甲醇诱导表达96 h,采用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白。（2）rSP-A对MO增殖的影响:将不同浓度（10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL）巴什拜羊和盘羊杂交羊的rSP-A添加于MO培养液中进行体外培养,采用平板菌落计数法观察MO菌落数,实时荧光定量PCR法检测MO 16S rRNA表达量。（3）rSP-A对MO代谢的影响:将不同浓度两种羊的rSP-A添加于MO培养液中进行体外培养,于1 d、3 d、5 d、7 d收集培养液,使用酸化法检测培养液在550nm的吸光值(OD550)。（4）rSP-A对MO黏附作用的影响:在MO与小鼠肺上皮细胞黏附过程中添加不同浓度两种羊的rSP-A,采用半数变色单位法测定黏附率,实时荧光定量PCR法检测黏附素P113基因的表达量。（5）rSP-A对EOS杀伤MO的影响:采用不连续密度梯度离心法分离羊外周血嗜酸性粒细胞,感染MO后添加不同浓度两种羊的rSP-A共同作用30 min,再将其接入平板中进行体外培养7 d,菌落计数法统计作用后菌落数。结果:（1）甲醇诱导真核载体表达后,经SDS-PAGE电泳检测在26.38kDa处出现目的条带,纯化后杂蛋白大大减少,仅出现了蛋白分子量为26.38kDa的单一条带,与预期蛋白分子量一致,说明巴什拜羊和盘羊杂交羊rSP-A表达成功,且纯化效果良好。（2）平板菌落计数结果显示,巴什拜羊10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL实验组菌落数分别比对照组减少了8.35%（P>0.05）、23.04%（P<0.05）和40.03%（P<0.01）;盘羊杂交羊rSP-A三个实验组菌落数分别比对照组减少了6.73%（P>0.05）、21.74%（P<0.05）和37.11%（P<0.01）;实时荧光定量PCR检测结果显示,添加rSP-A培养4 h后MO 16S rRNA拷贝数降至最低,巴什拜羊3个rSP-A浓度组的拷贝数为对照组的28.85%（P<0.05）、22.19%（P<0.01）、18.51%（P<0.01）;盘羊杂交羊的3个rSP-A浓度组的MO 16S rRNA拷贝数为对照组的68.16%（P>0.05）、28.65%（P<0.01）、20.95%（P<0.01）。（3）检测培养液550nm处吸光值,结果发现:1 d时,20μg/mL组显著低于对照组（P<0.05）,40μg/mL组极显著的低于对照组（P<0.01）,从第3d开始各实验组与对照组相比均极显著降低（P<0.01）,第7 d时,巴什拜羊和盘羊杂交羊40μg/mL与对照组相比OD值分别降低了37.6%（P<0.01）和35.7%（P<0.01）。（4）b半数变色单位法显示:巴什拜羊和盘羊杂交羊40μg/mL组的MO黏附率比对照组分别减少了5.93%（P<0.05）、6.60%（P<0.05）,与对照组差异显著;Real-time qPCR法结果显示:巴什拜羊和盘羊杂交羊40μg/mL组的黏附素P113基因mRNA表达量比对照组分别下降了23.7%（P<0.01）、22.9%（P<0.01）。（5）结果表明:10μg/mL组与对照组相比EOS对MO的杀伤率分别下降了5.6%（P<0.05）和6.1%（P<0.05）,20μg/mL组比对照组分别下降了12.4%（P<0.01）、12.6%（P<0.01）,40μg/mL组比对照组下降了19.8%（P<0.01）、20.4%（P<0.01）;结论:（1）两种羊的rSP-A对体外培养的MO的增殖具有明显的抑制作用;（2）两种羊rSP-A能够显著降低体外培养的MO的代谢率;（3）较高浓度（40μg/mL）的巴什拜羊和盘羊杂交羊rSP-A能够显著抑制MO的黏附。（4）两种羊rSP-A能够显著抑制EOS对MO的杀伤。