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膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,具有发病率高、易复发、预后差等特点。巴西苏木素是从苏木中提取的有效成分,课题组前期结果显示,巴西苏木素对膀胱癌T24细胞具有显著的抑制作用,利用数字基因表达谱对药物处理前后T24细胞的基因表达变化进行检测,发现c-Fos和GADD45β在巴西苏木素处理后表达量显著升高,在T24细胞中超表达c-Fos和GADD45β也能显著抑制T24细胞的生长,由此推测,c-Fos和GADD45β在巴西苏木素致死T24细胞的过程中起到重要作用。在此基础上,本文研究巴西苏木素对不同膀胱癌细胞的毒性作用,并在数字基因表达谱的结果中进一步筛选得到HO-1和HSP70A两个候选基因,分析巴西苏木素处理不同膀胱癌细胞后c-Fos、GADD45β、HO-1和HSP70A的表达变化,研究候选基因在巴西苏木素致死不同膀胱瘤细胞中的功能,探究巴西苏木素致死膀胱癌细胞的作用途径和机理。一、巴西苏木素对三种膀胱癌细胞的毒性作用以T24、J82、5637三种膀胱癌细胞为研究对象,利用巴西苏木素对其进行处理。药物处理后形态学观察发现,三种细胞的数目均显著减少,伴随有细胞皱缩、形态不规整现象,表明巴西苏木素显著降低这三种肿瘤细胞活性。采用MTT法检测巴西苏木素不同浓度、不同处理时间对三种细胞的影响,结果显示,巴西苏木素对三种膀胱癌细胞均有强致死作用。二、巴西苏木素处理三种膀胱癌细胞后的候选靶基因的表达情况前期研究表明,c-Fos和GADD45β可能在巴西苏木素致死T24细胞的过程中起到重要作用。本研究中,通过对数字基因表达谱进一步筛选得到HO-1和HSP70A两个基因。32μg/mL巴西苏木素处理T24、J82、5637三种细胞后,提取RNA并制备cDNA,利用Real-time quantitative PCR(qPCR)技术检测c-Fos、GADD45β、HO-1、 HSP70A四个基因的表达变化,结果显示,药物处理后,c-Fos、GADD45β和HSP70A在三株膀胱癌细胞中均显著升高；HO-1在T24细胞中表达不变化,但在J82和5637细胞中表达显著升高。三、候选靶基因在巴西苏木素致死三种膀胱癌细胞中的功能研究为进一步探讨c-Fos、GADD45β、HO-1和HSP70A在巴西苏木素致死膀胱癌细胞中的功能,本研究构建上述基因的真核表达载体,并将其通过脂质体法转染T24、J82和5637三种膀胱癌细胞,实现候选基因在肿瘤细胞的超表达,检测超表达后细胞形态和活性的变化。结果显示,超表达c-Fos后,T24、J82、5637三种细胞数目明显减少,细胞活性均显著下降；超表达GADD45β后,T24细胞活性显著下降,而J82、5637细胞活性上调；超表达HO-1后,T24、J82活性没有变化,5637细胞活性上调：超表达HSP70A后,T24、J82细胞活性不变,5637细胞活性下降。分析结果表明,c-Fos可能在巴西苏木素致死不同膀胱癌细胞中起到重要作用。随后,为研究基因间相互关系及作用途径,利用qPCR对细胞中超表达某个基因后其他基因的表达变化进行检测,结果显示,在J82细胞中,四个候选基因间可通过的途径相互作用；c-Fos和HSP70A、GADD45β和HO-1这两对基因间不具有相互作用；HSP70A位于HO-1的上游,HSP70A表达升高后可相应上调HO-1的表达。