本研究基于日本岡山大学病院神经外科的临床病例研究,在神经胶质瘤患者的临床病例统计中,发现服用抗抑郁治疗药物的患者,对比同期未服用抗抑郁治疗的患者,其肿瘤的发生发展,影像学检查结果、实验室检查结果、肿瘤的病理分期、临床分期等参数均显示出肿瘤发展停滞甚至自愈的倾向。基于此统计结果,本研究延续日本岡山大学细胞生理研究室对该课题的讨论和研究,在多种5-羟色胺再摄取抑制剂药物(SSRIs)中筛选出最佳有效药物的实验即已完成的基础上,研究该种药物—氟伏沙明(Fluvoxamine)对神经胶质瘤细胞(U87PA、U251)体外抗增殖作用的现象和机制进行探讨,考察该药物是否可以抑制胶质瘤细胞的生长转移以及侵袭,本文主要对于氟伏沙明对恶性神经胶质瘤细胞的侵袭性的影响以及其可能的作用机制进行解明。目的:研究氟伏沙明对脑恶性神经胶质瘤细胞生长、形态、迁徙转移的影响以及可能的分子机制。方法:(1)采用MTT比色法(四甲基偶氮唑蓝法)观察,分别于不同时间6h、12h、24h、48h,不同浓度 10uM、15uM、25uM、35uM、45uM、50uM、60uM 氟伏沙明的作用下,检测人神经胶质瘤细胞U87PA生存率的情况,目的是摸索出最佳药物浓度范围和毒性范围。(2)应用细胞刮伤愈合分析实验(Wound Healing Assay),观察细胞在不同氟伏沙明浓度15uM、25uM,在Omin、12h、24h不同时间对癌细胞生长迁移活动的影响;(3)通过免疫荧光染色进行流式细胞学(FCM)实验,观察15uM、25uM浓度的氟伏沙明对神经胶质瘤细胞系U87PA、U251中,药物对单个细胞F-actin含量的影响;(4)应用共焦显微镜观察不同浓度氟伏沙明15uM、25uM、35uM,在不同作用时间下Omin、20min、60min,经鬼笔环肽(phaloidin-555)染色的肿瘤细胞内F-actin的含量变化,以及肿瘤细胞形态变化;(5)通过蛋白印迹分析实验(Western Blotting)定量检测不同浓度氟伏沙明药物(15μM、25μM、35μM)对肿瘤细胞内RhoGTP蛋白酶分子家族成员CDC42(细胞分裂周期蛋白42)、Rac1、RhoA蛋白表达变化水平的影响。结果:(1)MTT比色法检测,氟伏沙明各浓度组(10uM、15uM、25uM、35uM、45uM、50uM、60uM)对胶质瘤细胞U87PA均显示抑制作用,经氟伏沙明处理6h-48h后,较对照组,各实验组的OD值均有下降,其差异具有显著性(P<0.05)。随着药物浓度增加,药物作用时间增加,一定药物浓度范围内,各组OD值均有下降,呈明显的剂量-作用时间-效应的依赖关系,其中,在药物浓度35uM内,该范围是处理细胞的最佳实验范围。(2)在细胞刮伤愈合分析实验中,加入氟伏沙明的实验组比未加入氟伏沙明实验组中的癌细胞的迁移现象明显减少(包括细胞数量和细胞生长状态),氟伏沙明在一定浓度范围内,能直接抑制U87PA细胞运动和迁移,呈现出浓度-时间-剂量依赖关系。(3)流式细胞学(FCM)实验显示,氟伏沙明通过解聚和抑制细胞骨架蛋白Actin(肌动蛋白)的F-actin(丝状肌动蛋白)的聚合来抑制细胞运动,从而达到抑制肿瘤的生长和迁移。(4)细胞荧光免疫学实验中可观察到,加入氟伏沙明的实验组中:细胞缩小,呈丝状聚合的F-actin随药物浓度增加,F-actin逐渐解聚,直到消失,氟伏沙明通过抑制肌动蛋白的持续性聚合作用,从而抑制肿瘤细胞的生长活动。(5)蛋白印迹实验(Western Blotting)显示,氟伏沙明下调肿瘤细胞中RhoGTP蛋白家族中的CDC42分子表达,使F-actin的合成减少,从而抑制肿瘤的生长侵袭和转移。结论:本实验首次通过体外实验,经MTT比色法实验检测出最佳药物浓度范围,在该浓度范围内分别在细胞刮伤愈合分析实验、流式细胞学实验、细胞荧光免疫实验、蛋白印迹实验,证实了 5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)具有抗人神经胶质瘤细胞增殖和运动迁移的作用,并且推论这种抑制作用是通过下调肿瘤细胞中的RhoGTP蛋白酶家族基因CDC42表达,影响细胞中肌动蛋白单体(G-actin)聚合为丝状肌动蛋白(F-actin)达到抑制肿瘤细胞生长、转移和侵袭。