论文部分内容阅读
目的:羊水栓塞是临床产科高死亡率的疾病之一,因常表现为不可预料的发病,且病程发展极快,患者多迅速死亡,从而导致临床医生陷入诊断与治疗的盲区。本课题拟通过使用怀孕大鼠模拟产妇羊水栓塞的过程,研究PAI-1、CPA3及ET-1在大鼠羊水栓塞模型制备前后羊水、血清及肺组织中的变化,探讨羊水栓塞的发病机制,为临床诊断提供参考。 方法:SD怀孕大鼠30只,胎龄20d,体重280g~400g,随机分为3组,对照组(生理盐水组)、实验组1(羊水组)、实验组2(羊水-胎粪配比液组)。麻醉生效后,术前眼眶取血备用;开腹行子宫次全切除术,分离腹主动脉用于术后取血,收集羊水、胎粪于清洁EP管中备用;按照体重分别注射生理盐水、羊水原液、羊水-胎粪配比液,连续观察60min后处死。取出大鼠右肺,10%甲醛溶液固定、包埋,石蜡切片行HE染色与APM特殊染色,免疫组化检测肺组织中CK16的表达,ELISA法分析血清、羊水及羊水-胎粪配比液中PAI-1浓度,IHC检测肺组织中CPA3、 ET-1的表达。所有数据使用SPSS21.0处理,组内进行配对t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05,有统计学意义。 结果: 1.怀孕大鼠模拟羊水栓塞模型制备过程中,对照组无异常表现、无死亡发生;实验组1在60min内未发生死亡,羊水注入后大鼠表现异常,包括:呼吸急促、抽搐、鼻尖、脚掌湿冷、尾部青紫、大小便失禁等;实验组2异常表现较实验组1明显且出现时间更早,其中有一例在60min内死亡。 2.肉眼观对照组肺组织肺组织呈淡粉色,实验组呈深粉色。 3.肺组织石蜡切片HE染色示:实验组1及实验组2的大鼠肺组织均可见不同程度肺充血征象,以实验组2更为明显,均伴有大量炎性细胞浸润,肺小血管内可见羊水成分,如疑似淡染的粘液成分和角化鳞状上皮的细丝状物质,对照组未见明显异常。 4.肺组织石蜡切片APM特殊染色:实验组1和实验组2肺中小血管内可见呈桃红染色的角化鳞状上皮,鲜蓝染色的粘液成分,对照组未见明显异常。 5. CK16IHC染色示:实验组1和实验组2在大鼠肺血管内可见呈棕黄色、细丝状、绒絮状角化鳞状上皮,对照组未见明显异常。 6.大鼠血清PAI-1浓度 Elisa法检测结果示:对照组实验前(876.88±57.23)ng/L,注入生理盐水后(860.94±35.00)ng/L;实验组1实验前(860.63±63.14)ng/L,注入羊水原液后(1373.75±79.02)ng/L;实验组2实验前(873.63±56.18)ng/L,注入羊水-胎粪配比液后(1509.06±37.00)ng/L。 7.大鼠羊水和羊水-胎粪配比液中PAI-1浓度 Elisa法检测结果示:羊水原液中PAI-1浓度约为(945.10±74.01) ng/L,1%羊水胎粪配比液PAI-1浓度约为(1298.75±128.44)ng/L。 8. CPA3 IHC结果示:实验组大鼠肺支气管上皮细胞、肺血管内皮细胞、肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞胞浆呈棕黄色阳性表达,且实验组2表达更明显;对照组为阴性或弱阳性表达。 9. ET-1 IHC结果示:实验组肺组织肺泡壁及肺间隔、炎性细胞(中性粒细胞、巨噬细胞)、器官上皮细胞(支气管粘膜上皮、血管内皮)呈棕黄染色,实验组2更明显;对照组为阴性或弱阳性。 10. CPA3、ET-1半定量检测结果示:经测量平均光密度值为,对照组CPA3为0.078±0.055,ET-1为0.062±0.025;实验组1 CPA3为0.233±0.194,ET-1为0.126±0.021;实验组2 CPA3为0.499±0.118,ET-1为0.175±0.035。 结论: 1.经HE染色、APM特殊染色和IHC-CK16染色证实实验大鼠羊水栓塞模型制备成功。 2.怀孕大鼠羊水栓塞后的症状与体征与进入母体的羊水性状、成分有关。 3.羊水中大量PAI-1大量进入母体可能加剧了羊水栓塞时凝血-纤溶系统的破坏。 4. PAI-1、CPA3、ET-1可能与羊水栓塞的病理生理过程有一定相关性。