目的:乳腺癌是仅次于肺癌的第二大容易发生脑转移的恶性肿瘤,随着诊治水平的提升,复发转移的乳腺癌患者生存时间明显延长,显著增加了患者发生脑转移的机会,因而,乳腺癌脑转移患者发病率逐年升高。BRAF基因是一种在哺乳动物中广泛存在的、保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在恶性肿瘤中出现突变频率最高。在恶性肿瘤细胞中,倘若发生BRAFV600E突变,从而持续激活MEK-ERK通路,以至促进细胞持续增殖,抑制细胞凋亡,进而引起肿瘤的侵犯转移。Schindler等人通过对1 320例神经系统肿瘤进行BRAF基因突变的研究,报道了在多形性黄色星形细胞瘤中,神经节胶质瘤和星形细胞瘤存在较高的突变率,分别为66%、18%和33%。有60%～80%的星型细胞瘤表现出BRAF的活性增强,这种活性改变是由于基因的复制过程变化或点突变引起的。乙酰基亚硝基脲(Ethylnitrosourea,ENU)是一种人工合成的有机化合物,能够在多种生物体细胞内引起发生随机突变,尤其是单碱基突变。ENU能够通过烷基化反应将乙烷基置换入某些DNA碱基的基团中,使相应碱基烷基化,从而引起碱基配对的错误,致使生物基因突变,该反应不依赖于任何代谢过程。ENU的致突变作用在生物体的各种组织器官中均存在并能发挥效用,近50年来,ENU 一直作为小鼠发育模型中的一种有效诱变剂使用。本研究利用ENU对经筛选后的乳腺癌细胞的诱发突变作用,可在很短的时间内在小鼠细胞中产生大量的随机突变,研究BRAF基因在乳腺癌脑转移中的影响、探索生物的遗传因子以及建立人类疾病的动物模型。这些研究可用于寻找治疗策略,使抗药性肿瘤重敏,研究作为乳腺癌脑转移治疗靶点的可行性。研究方法:1.使用Dabrafenib处理小鼠乳腺癌肿瘤细胞,采用CTG检测法,寻找合适的药物处理浓度以及检测不同浓度下Dabrafenib对小鼠肿瘤细胞的抑制作用。2.使用乙酰基亚硝基脲(ENU)处理经Dabrafenib筛选抑制后的4T1细胞。3.挑取单克隆细胞培养,提取其DNA,测序,检测BRAF基因是否有变异。4.建立小鼠乳腺癌模型,检测BRAF突变是否对脑转移产生影响,以及ENU致肿瘤细胞突变后重敏对Dabrafenib的敏感性。5.建立小鼠乳腺癌肿瘤脑转移模型,分组进行对照比较,同时通过Dabrafenib药物给予,验证其对小鼠乳腺癌肿瘤脑转移是否具有抑制作用。结果:已有的实验结果显示,Dabrafenib药物对于肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用,而经Dabrafenib筛选并抑制后的4T1细胞,ENU依然能够诱导其在BRAF基因上的突变。在体内实验中,Dabrafenib对BRAF-M的抑制效果优于Origin细胞。结论:ENU能够通过诱导小鼠乳腺癌细胞产生突变,其可使乳腺癌细胞对Dabrafenib重敏,对治疗乳腺癌脑转移存在临床应用前景。