新孢子虫病(Neosporiasis)是一种由犬新孢子虫(Neospora caninum)引起的全球性寄生虫病。属于顶复门，孢子虫纲，球虫亚纲，真球虫目，肉孢子虫科，新孢子虫属。主要寄生在宿主的中枢神经系统、肌肉、肝、脑及其它内脏组织。该病于1984年首次在挪威发现，于1988年被Dubey博士命名为犬新孢子虫。新孢子虫的终末宿主:犬和狐狸;中间宿主:牛、羊、马、猪、兔等，该病主要引起孕畜的流产或死胎，以及新生儿的运动神经障碍，对牛的危害尤为严重，是引起牛流产的主要原因之一。该病呈世界性分布，广泛分布于欧洲等30余国家，部分牛群血清抗体的阳性率达到80％，我国奶牛的血清抗体阳性率为30％左右。因此有效控制新孢子虫病的发生是当务之急。本试验将新孢子虫的致密颗粒蛋白GRA7基因与GRA2基因通过柔性氨基酸连接，利用SOE PCR技术串联在一起，连接到表达载体中，表达出有良好免疫反应原性的重组蛋白。　　本试验从培养的新孢子虫Nc-1株提取RNA，反转录成cDNA，并以新孢子虫cDNA为模板，用NcGRA7的引物，进行第一次PCR扩增，得到大小为696 bp的目的片段;用NcGRA2的引物，进行第二次PCR扩增，得到大小为567bp的目的片段;应用SOE-PCR将两次PCR的产物拼接起来，得到串联基因NcGRA7-NcGRA2，大小为1263 bp。然后将该串联基因与pMD-19-T simple载体连接，经PCR鉴定，双酶切鉴定，测序鉴定，确定两个基因成功串联，将NcGRA7-NcGRA2基因片段和原核表达载体pGEX-4T-1连接，经Western blot分析，结果表明，重组原核表达载体成功表达串联蛋白。将NcGRA7-NcGRA2基因片段和真核表达载体pcDNA3.1连接，经IFAT鉴定，结果表明重组真核载体可以在哺乳动物细胞内表达外源蛋白。