论文部分内容阅读
目的：当前化疗和靶向治疗都由于耐药问题的出现而阻碍了其临床疗效的延续。然而，化疗联合表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂（EGFR-TKI）被推荐作为一种策略用于克服非小细胞肺癌（NSCLC）患者EGFR-TKI获得性耐药。本研究通过体外实验探讨靶向药物吉非替尼联合化疗药物培美曲塞作用于EGFR-TKIs获得性耐药的NSCLC细胞株PC9/GR的抗肿瘤效应，并探讨其可能机制。方法：吉非替尼和培美曲塞单药以及联合给药作用于NSCLC吉非替尼获得性耐药PC9/GR细胞株。MTT法检测不同浓度的吉非替尼和培美曲塞对PC9/GR细胞株的增殖抑制作用，并分别计算出两单药对PC9/GR细胞株的半数抑制率（IC50）及两药联合作用于PC9/GR细胞的联合指数（CI）。Annexin V-FITC荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化；流式细胞仪分别检测不同药物处理组对PC9/GR细胞株细胞周期及凋亡率的影响。蛋白质印迹法检测不同药物处理组对PC9/GR细胞中p-AKT及Bcl-2蛋白水平的影响。结果：吉非替尼和培美曲塞作用于PC9/GR细胞72h的IC50分别为（4.94±0.44）μmol/L和（0.51±0.023）μmol/L，两药均呈剂量依赖性的增殖抑制作用，且两药联合时表现出明显的协同效应(CI<1)。细胞周期分析显示吉非替尼将PC9/GR细胞阻滞于G0／G1期；而培美曲塞将细胞阻滞于S期；培美曲塞联合吉非替尼使得G0/G1期细胞比例降低，而使相应的S期细胞比例增多(P<0.01)。经Annexin V-FITC染色的各组细胞在荧光显微镜下显示两药联合组的细胞形态不规则，处于凋亡晚期的细胞较其他处理组明显增多，可见细胞核固缩、碎裂。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率结果显示，联合用药组的细胞凋亡率高于阴性对照组及单独用药组，差异有统计学意义（P<0.05）。在检测蛋白表达过程中，我们发现培美曲塞能上调p-AKT的表达水平；吉非替尼联合培美曲塞处理组的p-AKT及Bcl-2较对照组明显下降。结论：本研究通过体外研究的方式，证明了培美曲塞与吉非替尼联用对NSCLC吉非替尼获得性耐药PC9/GR细胞株具有较好的协同作用，可增强耐药细胞对吉非替尼的敏感性，提示两药联合可能使EGFR-TKI获得性耐药的NSCLC患者获益。