研究背景:多项研究表明TIPE1在各种癌症肿瘤中参与细胞凋亡,可预测病人的预后,是一种癌症的识别生物标志物。但在卵巢癌中,TIPE1的临床意义、生物学功能尚未阐明。而卵巢颗粒细胞的凋亡能影响卵泡发育,因此研究TIPE1在卵巢颗粒细胞中的作用,颗粒细胞是卵子周围的大细胞群,从而探讨TIPE1对卵子发育环境可能的影响。研究目的:探讨TIPE1在卵巢癌组织中表达的临床意义;TIPE1在卵巢癌和卵巢颗粒细胞中的作用,以及TIPE1促凋亡的机制。研究方法1.用组织芯片免疫组化、qRTPCR、免疫蛋白印迹等方法检测TIPE1在卵巢癌组织中的表达,分析90例卵巢癌临床样品中TIPE1的表达以及和生存预后的关系。2.通过感染慢病毒建立稳定的TIPE1高表达A2780、SKOV-3卵巢癌细胞株,构建卵巢癌细胞模型,用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞凋亡实验,Balb/c裸鼠成瘤实验等方法,观察TIPE1对卵巢癌细胞活性和凋亡的影响。3.通过感染慢病毒建立稳定的TIPE1高表达卵巢颗粒细胞株,构建卵巢颗粒细胞模型,用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞凋亡实验,电化学发光法等方法,观察TIPE1对颗粒细胞活性和凋亡的影响,以及对颗粒细胞合成和分泌雌激素的影响。4.通过用qRTPCR、免疫蛋白印迹、组织免疫荧光实验等方法分析卵巢癌细胞和颗粒细胞模型中,caspase 3、caspase 8和caspase 9的表达情况,探讨卵巢癌细胞和颗粒细胞中TIPE1对效应凋亡蛋白caspases表达的影响。在高表达了TIPE1的卵巢癌细胞和颗粒细胞中用z-VAD抑制caspases的表达,验证TIPE1通过促进caspases表达来发挥促凋亡作用。研究结果:1.TIPE1在卵巢癌组织和细胞系中低表达;TIPE1表达水平与卵巢癌患者预后不良之间存在负相关关系。2.体内及体外实验均证实,TIPE1高表达能够抑制卵巢癌细胞活性和增殖,以及诱导细胞凋亡。3.TIPE1高表达能够抑制颗粒细胞活性和增殖,诱导细胞凋亡。4.TIPE1高表达能促进卵巢癌细胞和颗粒细胞中caspases(3、8和9)的表达,促进细胞凋亡。研究结论:1.TIPE1可作为预测卵巢癌患者不良预后的潜在标记物。2.TIPE1通过促进caspases表达抑制卵巢癌细胞和颗粒细胞增殖。