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肝素是糖醛酸和葡萄糖胺残基通过1,4糖苷键连接而成的,它是高度硫酸化线性粘多糖,通常存在于动物的肝脏、肺脏,小肠粘膜等组织细胞中。肝素由于其分子量较大,以及在多糖的组成及多糖链的长度上具有多分散性,从而皮下注射生物利用度低、药代动力学特征难以预测、用药个体差异大,易产生出血副作用。但是低分子肝素(LMWH)和普通的肝素相比分子量比较低,结构也更单一,具有较强的抗FXa (凝血因子)能力,而抗FⅡa (凝血酶)作用较大分子的肝素弱,能够减少出血的副作用。本文通过化学降解方法制备低分子肝素,以抗凝血活性作为追踪评价指标。研究其抗凝血活性,主要的研究方法如下:以市售猪小肠粘膜粉为原料,通过水提醇沉、Sevag方法除蛋白,提取粗提物。然后用苯酚硫酸法测得粗提物的糖含量为30.46 %,提取率为11.24%,可溶性蛋白的含量为20.63%。粗提物经过D208阳性大孔强碱吸附树脂纯化处理后得到肝素。经测定肝素糖含量为70.83%,糖醛酸含量为45.26%,硫酸根含量为32.54%,抗FXa 活性为 188.36 IU/mg,抗 FⅡa 活性 185.16IU/mg。旋光度为+50°。以亚硝酸钠降解纯化后的肝素,抗凝血活性作为追踪评价指标,制备低分子量肝素。从NaNO2浓度,pH值,降解温度,降解时间四个方面作单因素实验,筛选出三个点设计正交试验,经正交试验分析得到最优降解条件:NaNO2浓度为0.5%,pH值为2.8,降解温度为25 ℃,降解时间4.5 h。经过SephadexG-50层析柱对降解后的低分子量肝素混合物进行分离纯化,经测定低分子肝素的糖醛酸含量为43.62%,硫酸根含量为30.48%,抗FXa活性为182.48 IU/mg,抗FⅡa活性121.23 IU/mg。HPGPC验证纯化后的低分子量肝素分子量较集中。通过比旋光度测定、红外光谱、核磁共振分析的结构分析方法对纯化的低分子量多糖进行结构分析,结果显示:低分子量多糖比旋光度为+ 15°。利用质谱法(MALDI-TOFMS)分析得到低分子肝素的重均分子量约为4600 Da。