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运用免疫组化、细胞生物学和分子生物学方法，研究ox-LDL与动脉局部RAS系统的关系及二者对血管平滑肌细胞炎症因子表达的影响，由三个部分组成。 第一部分 实验室观察ox-LDL与血管局部RAS的关系 目的：研究表明ox-LDL与局部RAS系统在动脉粥样硬化形成过程中均起到重要作用。LOX-1是ox-LDL发挥作用的重要受体，ang Ⅱ则要通过AT1R及AT2R介导发挥作用。本研究旨在观察ox-LDL与局部RAS的关系，并利用多聚肌酐酸、氯沙坦、PD123319分别阻滞LOX-1、AT1R、AT2R，观察ox-LDL与RAS发挥作用的受体途径。 方法：①兔动脉粥样硬化组织ox-LDL、LOX-1和ACE表达：兔予以高脂忺食得到动脉粥样硬化模型，正常饮食组为对照，两组各5只。取主动脉中段制作切片，行HE染色观察及ox-LDL、LOX-1、ACE免疫组化染色。②Ox-LDL对血管平滑肌细胞LOX-1、ACE、AT1R、AT2R mRNA表达的影响：人脐带动脉平滑肌细胞原代培养，传至第5-7代用于实验，共分四组，第一组予20μg／mL ox-LDL分别作用1、6、12、24h；第二组以1、10、100μg/mL浓度梯度ox-LDL作用于细胞24 h；第三组予20 μg／mL ox-LDL+250μg/mL多聚肌酐酸干预，培养24h；第四组含0.1％FBS M199设为空白对照组。RT-PCR测定各组待测mRNA。③Ox-LDL对血管平滑肌细胞ACE活性的影响：人脐带动脉平滑肌细胞原代培养，实验分两大组。第一大组分为2组，0.1％FBS M199组为空白对照，另一组为20 μg／ml ox-LDL干预组，两组样本数各为10，紫外法测定两组培养液ACE活性。第二大组分3组，一组予20μg／mL ox-LDL+0.1μmol／mL血管紧张素Ⅰ作用于细胞24 h，一组予20μg／mL ox-LDL+0.1μmol／mL血管紧张素Ⅰ+10μmol／L卡托普利培养24h，最后一组予0.1μmol／mL血管紧张素Ⅰ作用24h作为对照，三组样本数各为3，放免法测定培养液ang Ⅱ水平。④血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞LOX-1、ACE、AT1R、AT2R mRNA表达的影响：人以不LD乙与益营局邵RAS关石弓交二者对欢誉平姆祝脚晒资舫因子麦之矛村时研咒沪戈漪要‘脐带动脉平滑肌细胞原代培养，分为四组，第一组予Ang H 0.1林mol几作用24h，第二组予Angll 0.1拌moUL+氯沙坦l“mo比作用24h，第三组予A刀911 0.1娜01几+PD一233191协mol/L作用24h，第四组为含0.1%FBs M199组作为空白对照。测定mRNA。结果:①正常对照兔主动脉组织基本无ox一LDL、LOX一1、ACE分布，而在高脂饮食组动脉粥样硬化组织内各成分染色明显增强。ox一LDL主要位于粥样组织内含泡沫细胞丰富的区域，且主要位于胞浆内，胞浆外也有分布。LOX一1主要分布于内皮细胞分布区，在巨噬细胞、靠近炎症反应区的平滑肌细胞处也有表达。ACE主要分布于炎症反应活跃区，比如斑块的肩部、内膜破溃处，内皮细胞表达水平相对较高，巨噬细胞、靠近炎症反应区的平滑肌细胞也有表达。LOX一1和ACE的分布区域存在高度一致性。②低浓度ox一LDL(<10林留mD即可明显促进血管平滑肌细胞LOX一1 mRNA表达，且浓度升高，LOX一1 mRNA表达增强。较高浓度ox一LDL(> 10卜岁ml)对ACE mRNA表达有显著的持续性促进作用。低浓度。x一LDL可明显促进AT IR mRNA表达，作用呈持续性，。x一LDL浓度升高，促进作用增强。10林创 mlox一LDL可促进ATZR mRNA表达，但高浓度时对AfZR mRNA表达有相对抑制作用。LOX一1抑制剂多聚肌醉酸可阻断ox一LDL的上述生物学作用。结果具统计学意义。③ox一LDL干预组培养液ACE活性明显高于对照组，P=0.0025。在Angl存在条件下，ox一LDL干预组培养液叨gn水平较对照组显著升高，P=0.0004;。x一LDL+卡托普利组即911水平较。x一LDL组显著下降，P二0.0003，但与对照组比较无统计学意义差异。④Angll可显著促进血管平滑肌细胞LOX一1 mRNA表达，抑制ACE mRNA表达，诱导Al，IRmRNA而不能诱导ATZR mRNA表达。ATIR拮抗剂氯沙坦可阻断angn的上述作用，但Al…ZR拮抗剂PD 1 23319则无明显作用。第二部分人外周血ox一LDL浓度与ACE活性关系及二者与血脂状态关系的研究目的:人体是个复杂的有机体，具体到人体内，ox一LDL与局部RAS关系的结论是否还能成立，不能简单推论，需要对人体的相关指标进行分析。许多既往研究表明血脂中的多种其他成分与动脉粥样硬化有关，ox一LDL浓度、ACE活性与它们是否存在某种联系也值得研究。这就是我们采取病人外周血进行本研究的基本目的。a丫二LDL与波考{局即剐s关戚交二者对波营严户溉翻细脸笑症因子麦送落时必研穷中戈漪萝方法:采取病人外周血，严重心衰及服用他汀类降脂药、ACE一I药者为排除对象，共28例，EUSA法测定血清ox一LDL浓度，紫外法测定ACE活性，并读取医院检验室对总胆固醇、甘油三酷、LDL、LP(a)的测定值进行比较分析。结果:外周血ox一LDL浓度与ACE活性呈正相关，高ox一LDL浓度组其外周血ACE活性明显高于低ox一LDL浓度组。外周血。x一LDL浓度和ACE活性均与总胆固醇、LDL呈正相关，而与甘油三酷、LP(a)之间则未发现相关性。第三部分ox一LDL和angll对血管平滑肌细胞IL一6、MN田一9 mRNA表达的影响目的:动脉粥样硬化是一慢性炎症过程，大量研究己证实ox一LDL和局?