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第一章成纤维细胞起源的胰岛素样生长因子2通过促进T细胞排除减弱抗肿瘤免疫的功能及机制研究背景:免疫检查点抑制剂(immune checkpoint blockade,ICB))单药治疗在多种肿瘤中反应率较低,其中重要的原因是T细胞浸润较低。既往研究根据T细胞的空间分布将肿瘤分为免疫排除型和免疫炎症型。这项研究主要目的旨在探究免疫排除型肿瘤中阻碍T细胞浸润的关键原因及其逆转方法。方法:针对TCGA数据库中7种肿瘤总共3549例样本进行了分析,根据其免疫排除评分的高低比较并得到了在排除型肿瘤中共同高表达的基因胰岛素样生长因子2(IGF2)。并根据IGF2的表达水平,研究其对免疫细胞浸润的影响。利用单细胞测序数据分析探究IGF2在肿瘤微环境中的主要起源,通过敲减Igf2研究其对肿瘤细胞及T细胞功能的影响,利用Western blot方法检测IGF2参与调节的信号通路。并选择IGF2受体抑制剂Linsitinib在体内及体外分别研究其对肿瘤生长及T细胞浸润的影响。建立皮下成瘤后,采取灌胃给药Linsitinib后通过流式检测免疫微环境中免疫细胞组成成分的改变,并进行RNA测序了解肿瘤组织中相关基因的表达变化。通过免疫组化及ELISA检测临床组织及血液样本中IGF2蛋白水平。收集并随访了142例没有接受过新辅助化疗的三阴性乳腺癌病人。结果:与免疫炎症型肿瘤相比,IGF2在免疫排除型肿瘤中高表达。单细胞测序数据及原代培养结果表明IGF2均主要由肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)分泌。自分泌的IGF2在CAFs中通过IGF1R/AKT/CXCL12轴阻止了T细胞浸润。在小鼠模型中,IGF2受体阻滞将免疫排除型肿瘤转化为免疫炎症型肿瘤,并以T细胞依赖的方式促进肿瘤消退。在体外,IGF2/IGF1R不直接影响幼稚T细胞的激活、迁移和卵清蛋白(ovalbumin,OVA)特异性的T细胞毒性,但可以显著影响CAF对T细胞迁移的抑制作用。IGF2受体阻滞和抗PD-1治疗协同增强抗肿瘤免疫力。最后,小鼠血浆中的IGF2反映了抗PD-1治疗中肿瘤消退的程度,而人血浆中的IGF2与T细胞排除相关。这些数据表明血浆IGF2可能是预测和评估对免疫疗法敏感性的生物标志物。结论:CAFs起源的IGF2以自分泌的形式经PI3K/AKT通路调节CXCL12的分泌,从而形成化学屏障阻碍了T细胞浸润。同时,IGF2促进成纤维细胞的增殖分化,从而又可形成物理屏障阻碍T细胞浸润。IGF2受体阻滞剂Linsitinib可以转化免疫排除表型,并与抗PD-1治疗联用可以起到协同增强抗肿瘤免疫的作用。IGF2可潜在作为预测免疫排除及生存预后的生物标志物。第二章MIRNA联合标记作为子宫内膜癌患者生存预后标志物的可行性研究背景:micro RNA(miRNA)已被验证为许多癌症的预后标志物。这项研究的目的是在子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)中鉴定新的miRNA预后生物标志物,并开发基于表达的miRNA标记,为EC患者提供生存风险预测。方法:从TCGA数据库中,于2018年4月下载了EC和临床信息的miRNA数据集。使用单因素和多因素Cox回归分析来确定预后因素。使用接受者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线的曲线下面积(under the curve,AUC)评估预后模型的敏感性和特异性。结果:将530例患者随机分为训练集和测试集。在561个差异表达的miRNA中,有4个miRNA(miR-4758,miR-876,miR-142,miR-190b)被证明是训练集EC患者总生存期(overall survival,OS)的预测生物标志物。根据4-miRNA模型的风险评分,将训练集中的患者分为OS显著不同的高风险和低风险组。此4-miRNA模型在测试集和总人群集中均得到验证。整个ROC曲线的AUC为0.704。同时,多因素Cox回归与其他传统临床参数相结合表明4-miRNA模型可以用作独立的OS预后因素。功能富集分析表明,这些miRNA参与了与癌症密切相关的生物学过程和通路。结论:建立了有效的4-miRNA标记作为EC患者OS的独立预后因素。