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第一部分散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因多态性与突变的筛检【目的】筛检内皮素受体B易感基因在中国汉族散发性先天性巨结肠症是否有突变与多态性，探讨EDNRB与先天性巨结肠症发病的关系。【方法】采用病例对照研究方法，收集104例散发性先天性巨结肠症外周血标本，120例正常儿童作对照。盐析法提取全部样本DNA，聚合酶链反应扩增内皮素受体B的7个外显子与内外显子交界区片段，单链构象多态性方法筛检异常泳动条带来判断突变与多态性。【结果】散发性先天性巨结肠症EDNRB基因外显子1，3，4，6和7均检测到突变或多态性位点，突变以短段型为主，而外显子2和5无此异常改变。【结论】中国汉族散发性先天性巨结肠症发病与内皮素受体B密切相关，尤其短段型HD，多态性位点与突变可能影响受体功能。第二部分散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因多态及突变类型的确定与分布【目的】研究中国汉族散发性先天性巨结肠症易感基因内皮素受体B突变与多态性特征，探讨不同碱基改变与先天性巨结肠症的发病关系。【方法】收集104例散发性先天性巨结肠症外周血标本，以120例正常儿童作对照。盐析法提取全部样本DNA，采用聚合酶链反应扩增易感基因内皮素受体B的7个外显子与内外显子交界区片段，单链构象多态性方法筛检异常泳动条带后，DNA直接测序确定突变与多态性位点，比较病例组与对照组多态性位点的等位基因频率及基因型分布差异。【结果】散发性先天性巨结肠症患者EDNRB基因突变率为6.7％(7／104)，4种突变方式，新发现突变点为c711 C＞A(2例)与c1157 T＞G(2例)，c723 T＞C(2例)与c1278 T＞C(1例)为已报道突变点，分别位于外显子3，6和7，6例为短段型，突变均为杂合体；共检测5个多态性位点，除c99 C＞T(P33P)外，c311 A＞T(N104I)、c831 G＞A(L277L)、c1148 C＞A(P383Q)及c1170 C＞A(S390R)四个位点的等位基因频率与基因型分布均差异显著(P＜0.05)，其中c1148 C＞A位点携带CC基因型的羁患风险高达8.2倍(95％CI3.1～21.7，P＜0.001)。【结论】中国汉族散发性先天性巨结肠症易感基因内皮素受体B存在多种突变方式，以短段型为主且均为杂合体突变，突变与临床表型存在异质性；内皮素受体B基因可检测到5个多态性位点，4个SNPs的等位基因频率和基因型分布频率在病例与对照组间差异显著，与HD发病有明显相关性，SNPs位点可用于评估羁患风险；不同种族sHD的EDNRB基因遗传特征存在差异。第三部分散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因多态性及突变与双亲遗传关系及HD易感性的研究【目的】研究中国汉族散发性先天性巨结肠症亲子代间EDNRB基因突变与多态性的遗传特征，并评估单体型与羁患风险的关系。【方法】收集104例散发性先天性巨结肠与其中42例患儿的双亲血样，以120例正常儿童作对照，通过PCR-SSCP与DNA测序确定并比较EDNRB基因的突变与多态性位点基因型与等位基因分布差异，以传递不平衡检验(TDT)分析42个三样本家系SNPs的传递不平衡，并分析sHD表型与SNPs的关联；以单体型遗传模式确定羁患风险。【结果】sHD患儿EDNRB基因突变率6.7％(7／104)，3例属种系突变，其中2例突变基因遗传自未发病母亲；检测发现5个cSNPs位点，TDT检验发现亲子代在c311 A＞T和c1148 C＞A两个非同义SNP位点存在传递不平衡，患儿易感等位基因T(c311 A＞T)、C(c1148 C＞A)频率明显比双亲高(P＜0.01)；SSA型在4个SNP位点与正常对照差异显著，LSA型仅1个位点，并且SSA型在c831G＞A与c1170 C＞A位点的等位基因频率与LSA型差异显著(P＜0.05)；c311 A＞T与c1148 C＞A两个多态性之间存在连锁不平衡，病例组单体型311A-1148A频率明显低于对照组(2.9％vs 16.7％，P＜0.01)，提示此单体型对sHD具有保护作用，单体型311T-1148C频率明显高于对照组(18.8％vs 7.9％，P＜0.01)；与携带311A-1148A单体型基因型(311A-1148A／311A-1148C，311A-1148A／311A-1148A，311A-1148A／311T-1148C)比较，非311A-1148A单体型携带者羁患sHD的风险增加到8.2倍(OR=8.153，95％CI：3.057～21.741，P＜0.001)。【结论】中国汉族人群散发性先天性巨结肠症EDNRB基因突变以种系突变为主；sHD易感基因EDNRB存在5个多态性位点，c311 A＞T和c1148 C＞A两个SNPs位点亲子代间存在传递不平衡，易感等位基因优先传递；sHD的SSA表型比LSA表型与EDNRB基因的关联性明显；单体型311A-1148A能降低发病风险，具有保护作用，非311A-1148A单体型携带者羁患sHD的风险增加到8.2倍(OR=8.153，95％CI：3.057～21.741，P＜0.001)。第四部分SOX10候选基因与散发性先天性巨结肠症相关性的研究【目的】研究性别决定区Y基因相关高可变区基因10(SOX10)在散发性先天性巨结肠(sHD)组织中表达情况，分子基础上探讨SOX10在sHD发病机制中作用。【方法】收集55例散发性先天性巨结肠手术标本，以24例非HD的正常肠管作对照，通过半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测SOX10 mRNA在不同病变肠管的转录水平，并分析其与临床参数的关系。【结果】SOX10在sHD病变肠管与正常对照肠管的组织均有表达，狭窄段表达水平为(0.766±0.038)，明显低于移行段(0.834±0.034)、扩张段(0.829±0.030)及正常对照组(0.824±0.021)的表达(P＜0.01)，而移行段、扩张段及正常对照间无统计学差异(P＞0.05)；短段型狭窄段表达明显高于长段型((0.775±0.037)vs(0.752±0.036)，P＜0.05)。【结论】SOX10基因表达异常与散发性先天性巨结肠症发病相关，尤其与长段型更密切；SOX10可能是出生后肠神经系统维持正常功能所必须。