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金黄色葡萄球菌(Saureus)是一种重要的致病菌，可以引起人和动物的多种疾病，其主要致病物质是毒素和酶。在S.aureus对数生长的中后期，细菌开始分泌RAP，RAP通过作用于膜表面的TRAP调控S.aureus各种毒素和酶的表达，进而对动物产生致病作用。但目前将RAP和TRAP免疫动物能否产生良好免疫保护作用仍不十分清楚。因此，本实验用原核表达的RAP和TRAP分别免疫小鼠，研究它们的免疫保护作用。
本课题采用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌毒力调控蛋白RAP基因和TRAP基因，将这两条基因片段纯化回收，分别与pMD18-T载体连接，并转化XLl-Blue大肠杆菌。经PCR.和BamHI、Sall双酶切鉴定后，将所获得的阳性克隆质粒命名为pMD-rap和pMD-trap。实验进一步将两个阳性克隆和pQE-30空载体用BamHI、SalI双酶切后回收，将从pMD-rap和pMD-trap上酶切获得的rap和trap片段分别与双酶切后的pQE-30载体连接，构建出重组表达载体pQE-rap和pQE-trap，并分别转化XLl-Blue大肠杆菌。分别将pQE-rap和pQE-trap进行测序，测序结果与Genbank中公布的序列相比，rap的同源性在99％以上，而trap的同源性为100％，编码的氨基酸序列的同源性为99.8％和100％。含有pQE-rap和pQE-trap的重组菌XLl-Blue经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳，并用抗Histidine单抗进行Western Blot分析，结果证明重组菌表达出分子量约39kDa和22kDa的蛋白质，二者分子量大小与DNAStar分析结果也相符，表明目的蛋白基因成功获得表达。在此基础上，用MagneHis蛋白纯化系统对表达的RAP和TRAP蛋白进行纯化，用弗氏佐剂乳化后免疫小鼠，每种蛋白分为10μg、20μg和50μg三个剂量，同时设生理盐水对照组。首次免疫后四周进行二次免疫，再过一周对小鼠进行攻毒，并观察13天。结果与对照组相比，至第13天，RAP和TRAP最高免疫剂量组保护率分别为60％和80％，表明RAP和TRAP有较好的免疫原性，可以作为疫苗的抗原应用于临床上防制S.aureus感染。