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本研究依托于吉林省科技发展计划项目（20180520045JH）。以大豆粕为原料,利用中性蛋白酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶制备豆粕血管紧张素转化酶（Angiotensin I-converting enzyme,ACE）抑制活性肽,通过单因素和响应面试验,固定中性蛋白酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶的最适酶解pH和最适酶解温度,优化酶的种类、酶解时间、加酶量指标,并以豆粕多肽得率为指标,确定传统酶解方法制备大豆粕多肽的最佳工艺为:酶的种类为复合风味蛋白酶,酶解温度50℃,酶解pH6.5,酶解时间7h,加酶量1%,底物浓度4g/100mL,得到的酶解大豆粕肽得率为12.122±0.06%。再进行超声波辅助复合风味蛋白酶酶解的单因素试验,固定酶解时间、酶解温度、酶的种类、加酶量、底物浓度参数,优化超声时间和超声功率,并以大豆粕多肽得率为评价指标,筛选出大豆粕多肽得率最高的超声波辅助复合风味蛋白酶酶解大豆粕的试验条件:超声波功率、超声时间因素:超声波功率为150W,超声时间为12min,酶的种类为复合风味蛋白酶,酶解温度50℃,酶解pH6.5,酶解时间7h,加酶量1%,底物浓度4g/100mL,得到的酶解大豆粕肽得率为22.87±0.08%,比传统的酶解方法得到的大豆粕多肽得率有明显地提高,大豆粕多肽得率提高了10.748%。将超声波辅助酶解获得的大豆粕酶解液经过超滤和AKTA层析相结合的方法对酶解液进行分离和纯化,并将纯化后的组分进行体外ACE抑制活性试验,以IC50为评价指标,筛选出具有体外ACE抑制活性的组分进行后续的LC-MS/MS氨基酸序列的鉴定工作。其中,选择实验室现有的200Da、1kDa、3kDa、10kDa、30kDa的滤膜对超滤辅助酶解得到的多肽酶解液进行分离,在将体外ACE抑制活性最好的<200Da的超滤组分(其IC50为:217.33±25.32μmol/L)进行AKTA层析,并获得5个峰A、B、C、D、E,对其分别收集并测定体外ACE抑制活性,最终发现B峰的体外ACE抑制活性最佳,为:136.33±25.15μmol/L,故将B峰组分进行LC-MS/MS鉴定,再与蛋白质数据库（UniProt）比对,获得了843条氨基酸序列。先根据ACE抑制活性与氨基酸结构关系,缩小筛选范围,后基于分子对接技术将获得的氨基酸序列作为小分子配体与ACE大分子受体进行电脑模拟对接,经过分子对接技术的筛选比较选出拥有最低结合能的肽序列,筛选出可能具有ACE抑制活性的6条肽序列IIVTP、GVRP、GLVP、LFEDP、LSEEY、VTPSP,经过FMOC固相合成后,将合成的四肽和五肽进行ACE抑制活性测定,最终得到GVRP和IIVTP的IC50最小,其IC50值分别为84±0.06μmol/L和77±0.08μmol/L。通过分子对接,模拟得到GVRP最佳的对接构型可以与ACE的晶体结构1O86的氨基酸残基Glu403,Glu384,Tyr523形成传统氢键、碳氢键、盐桥等分子间相互作用,其中Tyr523属于ACE的S1口袋;IIVTP最佳的对接构型可以与ACE的晶体结构1O86的氨基酸残基Lys511,Glu281,His353,His513,Glu162和Asp377形成传统氢键、碳氢键、盐桥等分子间相互作用,其中Lys511、Glu281、His353属于ACE的S2口袋,Glu162属于ACE的S1’口袋。本试验对酶解大豆肽得率工艺生产和大豆粕ACE抑制活性肽序列提供了一定的实验基础,为大豆粕蛋白肽的功能食品开发提供了新的思路。