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目的通过RSV体外感染小胶质细胞以及体外给予细胞因子作用于小胶质细胞,研究小胶质细胞感染活化及其分泌的细胞因子在神经元病变损伤中的作用,阐明RSV感染中枢神经元及引起中枢神经元病变的可能机制,为临床预防和治疗RSV中枢神经系统感染提供新的思路。方法RSV感染神经元SY5Y后,激光共聚焦观察神经元病变情况；再以RSV体外感染小胶质细胞CHME-5以及体外给予细胞因子作用于小胶质细胞,分别于感染后12、24、48、72和96 h收集细胞和培养上清液,并设立不同的组别,以未感染的细胞作为对照组,判断RSV感染小胶质细胞对神经元的影响。(1)PFU检测病毒通过Transwell小室情况；(2)酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子通过Transwell小室情况以及各组神经元细胞培养上清液中IL-6、IL-8和TNF-α炎症因子的表达；(3)激光共聚焦显微镜观察RSV感染和细胞因子作用于小胶质细胞后对神经元的影响；(4)免疫印迹法(Western-blot)检测各组不同时间点TLR3/RIG-I蛋白水平的表达变化及小胶质细胞中Hvl蛋白的活化情况； (5)用TRIzol法提取SY5Y细胞总RNA,通过实时荧光定量PCR法检测’ILR3/RIG-I mRNA转录水平变化；(6)流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果(1)PFU检测结果显示,RSV不能通过Transwell小室上层0.1μm孔径的聚碳酸酯膜。(2) ELISA法结果显示,细胞因子可以通过Transwell小室上层0.1 μm孔径的聚碳酸酯膜。正常对照组中IL-6、IL-8和TNF-α三种炎症细胞因子的表达量较低；经RSV感染后,SY5Y细胞培养上清液中的IL-6、IL-8和TNF-α的含量,随着感染时间的延长不断升高;与RSV感染组相比,细胞因子+CHME-5 Transwell组、RSV+CHME-5 Transwell组和RSV+细胞因子Transwell组中IL-6、IL-8和TNF-α表达量显著增加,且RSV+细胞因子Transwell组升高的更明显,差异从12h具有显著统计学意义(P<0.01)。(3)激光共聚焦显微镜检测结果显示,正常组SY5Y细胞分布均匀,胞体形态正常,细胞核完整,贴壁状态良好,突触较短。RSV感染后48 h细胞胞体膨胀,细胞核形态不规则、破碎不完整,突触增长；与感染组相比,72 h后细胞因子+CHME-5 Transwell组和RSV+CHME-5 Transwell组形态学变化明显；而RSV+细胞因子Transwell组与RSV感染组相比,死亡细胞较多,细胞核形态不规则、破碎不完整,突触更长。(4) Western blot法测定结果显示,正常对照组中TLR3/RIG-I蛋白表达量较低,RSV感染后TLR3/RIG-I表达上升,且随着感染时间的延长逐渐升高,12 h升高有统计学意义；与RSV感染组相比,细胞因子+CHME-5 Transwell组、RSV+CHME-5 Transwell组和RSV+细胞因子Transwell组TLR3/RIG-I表达量升高,且RSV+细胞因子Transwell组升高的更明显,差异从24 h具有显著统计学意义。正常的CHME-5细胞中Hv1蛋白表达较低,RSV感染后表达上升,且随着感染时间的延长逐渐升高；细胞因子作用后,Hv1蛋白表达也明显升高；RSV和细胞因子共同作用后,Hv1蛋白上调的更加明显,差异从24 h具有显著统计学意义。(5)在mRNA转录水平,通过实时荧光定量PCR检测正常组中TLR3/RIG-I的mRNA表达较低,在感染组中TLR3/RIG-I的表达量逐渐增高,且随着感染时间的延长逐渐升高,12 h升高有统计学意义；与RSV感染组相比,细胞因子+CHME-5 Transwell组、RSV+CHME-5 Transwell组和RSV+细胞因子Transwell组TLR3/RIG-I mRNA表达量升高,且RSV+细胞因子Transwell组升高的更明显,差异从24 h开始具有显著统计学意义。(6)流式细胞术结果显示,正常组细胞凋亡较少,而RSV感染SY5Y细胞后48和72 h,可见细胞出现显著凋亡；细胞因子+CHME-5 Transwell组和RSV+CHME-5 Transwell组此时与RSV组相比,凋亡更加明显,分别为33.98%和32.95%,与RSV组相比凋亡有统计学意义；而RSV+细胞因子Transwell组与RSV感染组相比,凋亡更加明显,为43.02%,具有显著统计学意义。结论RSV体外作用于小胶质细胞后,活化Hvl表达,产生的炎性细胞因子和病毒本身均可以导致SY5Y细胞损伤,突触增长,同时活化TLR3及RIG-I受体,使下游炎性细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α分泌升高,介导天然免疫活化的产生,导致神经元的损伤与凋亡。以上说明小胶质细胞在RSV感染中枢神经元所致损伤作用起促进作用。