目的:1.应用化疗药物阿霉素（doxorubicin,Doxo）诱导乳腺癌细胞株MCF-7获得性多药耐药发生,以此耐药诱导模型为基础将选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布（celecoxib）与耐药诱导剂量的阿霉素联合作用于MCF-7细胞,检测耐药相关基因及蛋白的变化,探讨塞来昔布对阿霉素诱导MCF-7细胞多药耐药发生的预防作用。2.联合应用塞来昔布及阿霉素,探讨塞来昔布对阿霉素细胞毒效应的增敏作用。3.从MDR1基因转录调控入手,检测相关转录因子在基因、蛋白水平的变化及其与DNA的结合活性,探讨塞来昔布下调阿霉素诱导MDR1过表达的机制。方法:1.四唑蓝（MTT）比色法:检测不同浓度阿霉素对MCF-7细胞的生长抑制效应,寻找适宜的阿霉素浓度及作用时间进行耐药诱导;联合应用阿霉素及低浓度的塞来昔布（无明显细胞生长抑制效应）,计算阿霉素对MCF-7细胞的半数抑制浓度（IC50）,分析塞来昔布对阿霉素细胞毒效应的增敏作用。2.逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测MDR1、MRP1、topoⅡ、GST、NF-κB、c-Jun及YB-1等基因的mRNA表达水平。3.流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞膜P-糖蛋白（P-gp）表达水平。4.细胞内罗丹明123（Rho123）潴留实验分析P-gp的功能状态。5.免疫印迹反应（Western blot法）检测MRP1、NF-κB、c-jun及YB-1蛋白表达水平。6.凝胶迁移滞后实验（EMSA）方法检测转录因子NF-κB及AP-1与DNA的结合活性。7.FCM检测阿霉素、塞来昔布单独作用及联合应用对MCF-7细胞周期的影响。结果:1.MTT结果显示:阿霉素0.05ug/ml作用于MCF-7细胞,3d后生长受抑制,7d后生长抑制效应明显减弱,生长抑制率分别为23.70%及9.03%;但在0.5ug/ml的浓度作用下,3d后生长抑制效应明显,7d后抑制效应进一步增强,生长抑制率分别为60%及72.90%;此表明,阿霉素0.05ug/ml作用7d,可诱导MCF-7细胞耐药发生。2.阿霉素0.05ug/ml处理MCF-7细胞7d与未处理组相比:RT-PCR发现MDR1及MRP1在mRNA水平上调（P＜0.01）;TopoⅡ及GST在mRNA水平差异性不显著（P＞0.05）;Western-blot发现MRP1蛋白表达与其mRNA表达水平相一致;FCM显示细胞膜P-gp表达上调,荧光强度为32.66±2.49,而未处理组为4.67±0.49（P＜0.01）。3.与阿霉素0.05ug/ml组相比,阿霉素0.05ug/ml联合塞来昔布（10uM,20uM）处理7d,MDR1、MRP1在mRNA水平下调（P＜0.01）;其蛋白表达与mRNA表达变化相一致;细胞膜P-gp荧光强度分别为6.41±0.71及5.55±0.50,而阿霉素0.05ug/ml组为32.66±2.49,差异性显著（P＜0.01）。4.阿霉素0.05ug/ml联合塞来昔布（10uM,20uM）处理7d,细胞内Rh123的荧光强度明显增加,分别为373.03±15.41及341.44±11.75,与阿霉素单用组72.77±8.88相比,差异性显著（P＜0.01）。5.阿霉素0.05ug/ml组与未处理组相比,转录因子YB-1、NF-κB和c-Jun在mRNA及蛋白水平均上调;阿霉素0.05ug/ml联合塞来昔布10uM组与阿霉素0.05ug/ml组相比,YB-1、NF-κB和c-Jun在mRNA及蛋白水平均下调。6.阿霉素0.05ug/ml组与未处理组相比,转录因子NF-κB和AP-1的活性明显增高;阿霉素0.05ug/ml联合塞来昔布10uM组与阿霉素0.05ug/ml组相比,NF-κB和AP-1的活性均明显降低。7.阿霉素联合塞来昔布10uM作用48h后,可显著抑制MCF-7细胞的生长,IC50为（0.38±0.04）ug/ml,而阿霉素单用的IC50为（0.67±0.03）ug/ml（P＜0.01）。8.与未处理组相比,阿霉素0.05ug/ml组及阿霉素0.05ug/ml联合塞来昔布10uM组,G₀+G₁期细胞比率均增加（P＜0.01）,S期细胞比率均减少（P＜0.01）;塞来昔布10uM单独作用组G₀+G₁期及S期细胞比率无显著差异性（P＞0.05）;与阿霉素0.05ug/ml组相比,阿霉素0.05ug/ml联合塞来昔布10uM组G₀+G₁期细胞比率增加（P＜0.01）,S期细胞比率减少（P＜0.01）;G₂+M期细胞比率在各组间均无显著差异（P＞0.05）。结论:1.阿霉素0.05ug/ml作用于MCF-7细胞7d可成功诱导多药耐药发生,细胞内MDR1、MRP1在mRNA及蛋白水平均上调。2.在MCF-7细胞中,塞来昔布可有效干预阿霉素诱导的MDR1、MRP1过表达,预防多药耐药的发生。3.塞来昔布下调MDR1基因表达与抑制转录因子YB-1、NF-κB和AP-1的表达及活性相关。4.塞来昔布对阿霉素的细胞毒效应有明显的增敏作用,可将MCF-7细胞阻滞于G₀+G₁期。综上所述,环氧合酶-2抑制剂塞来昔布可通过多种机制预防乳腺癌细胞多药耐药的发生,为临床肿瘤治疗提供新的策略。