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端粒酶是由RNA和蛋白质构成的一种核糖核酸蛋白复合物,能利用自身RNA(human telomerase RNA,hTR)为模板,通过端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTRT)催化合成染色体末端的端粒DNA重复序列,以维持染色体的完整和稳定。端粒酶活性在正常人的体细胞中(生殖细胞、部分造血细胞除外)表达阴性,然而在接近90%的肿瘤细胞中均呈阳性表达。研究证明端粒酶活性对于人肿瘤细胞的发生具有极其重要的作用,在大多数实验性肿瘤的发生过程中如果没有端粒酶的激活,仅仅通过癌基因的表达不能诱导细胞产生恶性表型。尽管端粒酶的单独激活并不能致瘤,但是hTRT表达所强化的端粒长度维持与某些原癌基因(如SV40大T抗原、H-ras癌基因等)的协同作用却足以导致一些正常细胞发生恶性转化。以上事实强烈地提示我们抑制端粒酶活性可能成为一种新颖的靶向治疗恶性肿瘤的途径。在端粒酶的三个组成成分(端粒酶RNA即hTR、催化蛋白hTRT及端粒酶结合蛋白)中,其催化亚基即hTRT对该酶活性起着最为关键的作用,被认为是端粒酶作用的限速因子。因此,抑制hTRT的表达成为近年来科研工作者的研究热点。本研究通过基因重组构建携带反义hTRT基因的真核表达载体,并采用脂质体转染将反义hTRT基因导入人肝癌细胞SMMC-7721细胞中。转染后细胞经TRAP-ELISA法检测端粒酶活性明显下降,Western Blot证实hTRT表达显著减少,Southern Blot检测证实端粒明显缩短,流式细胞计量术检测细胞周期发现细胞异型性降低,而处于分裂静止期的细胞数增多。显微镜下观察细胞形态发生改变,生长速度明显下降,出现接触性生长抑制,裸鼠皮下移植成瘤率显著降低,上述实验结果都有力地证明了反义hTRT基因可通过阻断细胞内hTRT表达抑制端粒酶活性,从而抑制肿瘤细胞的增殖并逆转其恶性表型。我们同时还将反义hTRT基因与化疗药物联合应用于肿瘤细胞,发现两者的联合作用效果优于二者任何单一治疗。总之,本研究证实了反义hTRT基因治疗的有效性,为进一步探索该方法应用于临床肿瘤治疗提供了实验基础。