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肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病,肺癌在我国的发生率已经占据了恶性肿瘤的首位,并在逐年增高。目前多种治疗方式的综合疗法对肺癌患者的生存时间虽有了一定的改善,但肺癌患者的总体存活率和生存质量远没有达到人们的期望值,尤其是传统化疗药物给患者带来的严重自身损害常常导致患者拒绝接受治疗。中医药在肿瘤治疗方面有毒副作用小、对患者症状改善明显、能提高患者的生存质量和长期用药费用低等多方面的优势,更容易被患者接受,因此中医药治疗肺癌受到越来越多的学者关注。 现代药理学实验研究和临床应用均表明,狼毒具有抑制肿瘤细胞增殖、阻止细胞分裂、诱导细胞凋亡等作用,有广泛的抗肿瘤谱,并从其中发现了多种抗肿瘤成分,然而,对于狼毒中的抗肿瘤成分说法不一,有人认为抗肿瘤成分是水溶性成分,也有人认为是脂溶性成分,考虑狼毒中脂溶性组份与水溶性组份的相互作用,结合民间治疗肿瘤中药的半水半酒煎煮方式,我们将狼毒用50%乙醇进行回流提取,保留了水溶性和脂溶性活性成分,对该提取物进行了体内外抗肿瘤作用研究,并探索了其可能隐含的新机制。 在本课题中,体外实验采用MTT法检测不同浓度的狼毒乙醇提取物对Lewis肺癌细胞的增殖的影响,细胞粘附实验,划痕实验,以及transwell迁移实验检测狼毒乙醇提取物对Lewis肺癌细胞的运动能力的影响,吖啶橙染活细胞检测狼毒乙醇提取物对细胞自噬现象的影响,同时检测用狼毒乙醇提取物处理过的肿瘤细胞中葡萄糖(Glu)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、游离脂肪酸(FFA)和甘油三酯(TG)的含量并采用Westernblot实验检测狼毒乙醇提取物对Lewis细胞自噬蛋白LC3及Beclin1基因的影响,初步探讨其可能的机制。体内实验用Lewis肺癌小鼠皮下移植模型测定狼毒乙醇提取物对Lewis肺癌的抑制率,生存时间的影响、同时检测瘤组织中GLUT1、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、FFA和TG水平,采用Lewis肺癌小鼠实验性肺癌转移模型检测狼毒乙醇提取物对肺癌转移的抑制作用。并采用免疫组化法比较肺转移肿瘤部位与非肿瘤部位GLUT1和脂肪酸合成酶(FAS)的差异。 体外实验结果显示,狼毒乙醇提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞的增殖呈剂量依赖性抑制,并降低粘附、迁移和运动的能力,能降低细胞内Glu、GLUT1、FFA和TG水平,促进Lewis肺癌细胞的自噬程度。 体内实验结果显示,与未治疗的模型小鼠比较,狼毒乙醇提取物呈剂量依赖性减缓肿瘤生长速度、阻止肿瘤转移、延长荷瘤小鼠存活时间。在本实验的条件下,抑瘤率为高剂量43.46%,低剂39.58%,狼毒乙醇提取物能降低瘤组织中GLUT1、LDH、FFA和TG水平,但增加SDH活性。 Westernblot实验显示,狼毒乙醇提取物可明显提高自噬Beclin1基因及蛋白LC3表达。 在免疫组化中,与正常小鼠肺组织比较,狼毒乙醇提取物也能抑制小鼠肺癌转移肿瘤部位的GLUT1和FAS。 综上所述,狼毒乙醇提取物对小鼠Lewis肺癌有明确的治疗作用,并具有抗转移的功效,其机制可能与调节细胞能量代谢有关。