2016-2018年山东省部分地区猪流感病毒分离株的进化分析及对小鼠的致病性研究

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猪流感(Swine influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起猪的一种急性、高度接触性、呼吸道传染病。猪呼吸道上皮细胞同时具有人流感病毒和禽流感病毒的唾液酸受体,可同时感染猪、禽和人流感病毒,因此,常常被认为是流感病毒的“混合器”。由于不同来源的流感病毒可同时感染猪并可在其体内发生基因重组而产生新型流感病毒,进而获得感染人的能力并引起流感大流行。因此,开展SIV的流行病学调查及致病性研究具有重要的公共卫生意义。本实验室为了解山东省及周边地区猪群中SIV的流行情况,在2016-2018年期间,对山东省不同养殖场和生猪屠宰场采集鼻拭子样品共计5260份。样品接种于10日龄非免疫鸡胚进行分离、鉴定,共分离到38株H1N1亚型SIV。选取21份毒株进行全基因组测序及进化分析,结果发现分离株出现两种基因型,其中18株病毒的PB2、PB1、PA、NP和M基因来自于2009年H1N1大流行的流感病毒(pdm/09 H1N1)分支,NS基因来自于经典型H1N1(CS H1N1)病毒分支,其余基因来自于欧亚类禽型H1N1(EA H1N1)分支的病毒,为源于EA H1N1、pdm/09 H1N1和CS H1N1的三重配H1N1病毒;另外3株病毒的PB2、PB1、PA和NP基因来自于pdm/09 H1N1病毒,NS基因来自于CS H1N1病毒,其余基因来自于EA H1N1病毒,为源于EA H1N1,pdm/09 H1N1和CS H1N1的另一种模式的三重配H1N1病毒。为进一步了解这两种基因型H1N1亚型SIV的致病性,我们选取4株病毒(SW/SD/LW16/17、SW/SD/TA25/17、SW/SD/TA95/17和SW/SD/TA97/17),以BALB/c小鼠为感染模型,以106EID50/只感染剂量滴鼻感染6周龄雌性BALB/c小鼠,通过感染后小鼠的体重变化、脏器病毒含量的测定、肺脏的病理组织学变化等指标来评估其对小鼠的致病性。结果显示,4株病毒对小鼠表均表现出一定的致病性。病毒感染后每组均有小鼠体重下降比率超过30%,判定死亡。脏器的滴定结果显示,4株病毒感染小鼠后在肺脏和鼻甲中同时检测到病毒复制,而在肾脏、脾脏和脑中均未检测到病毒;肺脏中的病毒含量为7.92 log10EID50/mL9.13 log10EID50/m L之间,鼻甲中的病毒含量为3.63log10EID50/mL6.29 log10EID50/mL之间。以上结果表明,不同基因型的H1N1以及同一基因型的不同毒株对小鼠均表现出一定致病性,。
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