甾体类激素药物在临床上广泛应用于抗炎、抗肿瘤以及心血管疾病的治疗和生育控制。甾体化合物结构十分复杂,其生理和药理活性取决于甾体母核上特定位点的取代基。甾体化合物的羟基化反应(11α-、11β-、15α-、16α-OH)是制备甾体类激素药物及重要中间体的关键技术之一。因化学合成法难以在甾体母核的特定位点引入羟基,工业上利用微生物转化,特别是丝状真菌介导的羟化反应来合成甾体羟化衍生物,如赭曲霉、黑根霉、蓝色犁头霉等。然而,甾体化合物微生物羟基化反应常存在投料量少,转化率低,转化特异性差等缺点。由于大多数现有的丝状真菌生产菌种的遗传背景不清晰,分子遗传操作困难,限制了对甾体转化菌种进行定向分子遗传改造。为了充分利用本课题组从生产菌种中克隆鉴定的甾体羟化酶基因,本文主要探讨甾体羟化酶异源表达宿主的构建,以期为新一代甾体高效转化工程菌奠定基础。黑曲霉遗传背景清晰,分子遗传操作技术成熟,且被用于多种生物制品的工业生产,是构建甾体羟化酶基因异源表达的理想宿主。本课题选取黑曲霉TCCC41650为出发菌株。为了使其适用于甾体羟化酶异源表达,文中对该菌株的雄甾-4-烯-3,17-二酮(4-AD) 16β-羟化酶基因CYP65基因进行了定向敲除,构建了丝状真菌甾体羟化酶基因的异源表达宿主。实验还对该异源表达宿主所适用的丝状真菌甾体羟化酶对应的底物适应谱进行了分析,结果显示,其对4AD、左旋乙基双酮、环氧黄体酮均未表现出活性,说明其可以应用于以此三种物质为底物的甾体羟化酶的异源表达。该异源表达宿主的建立为多种丝状真菌甾体羟化酶的高效表达奠定了基础,从而为构建甾体羟化高效工程菌提供了一条有效的途径。