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目的利用人乳腺癌细胞株MCF-7提取总RNA,经RT-PCR反应得到乳腺癌转移抑制基因BRMS 1的CDS(Coding Sequence),通过双酶切及连接反应将其连接到质粒pcDNA3.1/myc-his(-)B上,构建BRMS 1基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1并鉴定,为进一步研究恶性肿瘤的转移机制及肿瘤转移的基因治疗奠定物质基础。方法常规方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7, TRIZOL法提取细胞株总RNA;设计含有XhoⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物(上游引物含XhoI酶切位点,下游引物含HindⅢ酶切位点),经过逆转录反应获得BRMS1 cDNA的CDS序列,再以cDNA的CDS序列为模板进行PCR扩增反应,经回收、纯化、酶切后,连接到质粒pcDNA3.1 /myc-His(-)B上,构建乳腺癌转移抑制基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1,限制性内切酶酶切分析及基因测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK-293,行Western blot验证其是否表达。结果重组质粒pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1经XhoⅠ和HindⅢ双酶切后琼脂糖凝胶电泳显示5.46Kb和744bp两个片断, 5.46Kb的片断符合pcDNA3.1/myc-His (-)B酶切后的大小,744bp符合RT-PCR反应扩增后产生的BRMS 1基因片断酶切后的大小。人BRMS 1全长1485bp,其中CDS区域为(122bp-862 bp, 741bp),而扩增产生的BRMS 1 cDNA的基因片断为756bp,包含CDS序列。重组真核表达载体pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1经XhoⅠ和HindⅢ双酶切后,进一步将重组体进行基因测序分析,验证了克隆的人BRMS 1基因cDNA序列与GenBank[AF159141]公布的人BRMS 1基因的cDNA序列吻合,这一结果表明重组体pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1中插入的目的基因BRMS 1是正向、单倍插入。用pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1转染人胚肾细胞HEK-293,行Western blot检测出含有c-myc标签的蛋白,说明可以在真核细胞表达。结论成功构建了乳腺癌转移抑制基因BRMS 1真核表达载体pcDNA3.1(-)B/myc-BRMS 1,为深入研究BRMS 1基因功能和BRMS 1基因治疗奠定了物质基础。