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研究的背景及目的G蛋白偶联受体中有一种被称为血管活性肠肽受体（VIPR）,目前发现有VPAC1、VPAC2和PAC1三种亚型。研究证实,VPAC1在结直肠癌、乳腺癌、肺癌等多种肿瘤原发及其转移灶细胞中高水平表达,而VPAC2仅表达于良性平滑肌瘤等少数肿瘤;VPAC1高亲和力结合位点（Bmax）是正常组织的22.557.9倍。因此,VPAC1是一较为理想的肿瘤分子影像与靶向治疗研究靶标,并显示出潜在的应用前景。然而,目前VIP受体显像研究探针均为VIP全分子或其类似物,皆能与上述三种受体亚型结合,故缺乏针对VPAC1的高特异性。课题组前期利用噬菌体展示肽库全细胞差减筛选技术,筛选并鉴定得到高特异靶向VPAC1的线性十二肽（GFRFGALHEYNS,简称VP2）,其与VPAC1的结合亲和力显著高于天然配体VIP。本研究拟通过多肽化学合成技术合成VP2,同时在其氨基末端偶联甘氨酸-丙氨酸（D）-甘氨酸-甘氨酸-氨基丁酸[G（D）AGG-Aba]作为双功能螯合剂,探讨99mTc标记G（D）AGG-Aba-VP2（TP1724）的最佳条件,鉴定99mTc-TP1724的理化性质,研究其示踪动力学特性、正常动物体内的生物分布和动态显像变化特点,奠定以受体VPAC1为靶点肿瘤显像的基础。研究方法1.99mTc-TP1724制备:化学方法合成并制备多肽TP1724,99mTc的标记（SnCl2作为还原剂）,测定标记率（纸层析法）,比活度计算（直接法）。2.99mTc-TP1724多肽理化性质的鉴定:通过稳定性实验（体外）、一步法标记冻干试剂盒实验、HPLC（高效液相色谱）分析、HSA（人血清蛋白）结合实验、Cys（半胱氨酸）置换实验和脂（油）/水分配实验。3.示踪动力学的实验:选取健康的家兔9只,俯卧固定于木质实验台上,每只经左侧耳缘静脉注射99mTc-TP1724 200μl（37 MBq）;分别在注射1.5min、5min、10min、30min、60min、120min及240min后从右侧耳缘静脉抽取血液并称重、测量放射性（cpm）。按血液密度1 g/ml计,经参考源校正,将血样品放射性换算成kBq/L。用药代动力学（das3.1.6版本）软件分析,智能化分析平均血液放射性的浓度-时间数据,判断99mtc-tp1724在健康家兔体内的最佳房室模型,并得到其药-时关系式及示踪动力学参数。4.正常大耳兔体内spect显像:siemenssymbiat6spect/ct,探头配备常规准直器（低能高分辨率准直器）,能峰为140kev,窗宽为20%,矩阵128×128,zoom（放大系数）=1.0。将家兔绑定在实验木板上（仰卧位）,胸腹部对准探头视野中点。注射99mtc-tp172474mbq（经左侧耳缘静脉）,然后以1帧/sec采集60sec、1帧/min采集59min;分别于90、120、150、180和240min经时间衰减校正各预置计时采集1帧。利用roi技术,作出注射99mtc-tp1724后1h内动态影像的心、肾、肝、膀胱等组织器官t-a曲线。5.生物分布研究（正常昆明小鼠体内）:35只小鼠分成7组（随机表法）,5只/组。每只注入99mtc-tp1724100ul（3.7mbq）,经尾静脉注射入体内,分别在以下7个时间点（1.5min时、5min时、10min时、0.5h时、1h时、2h时与4h时）将小鼠立即处死,收集其血、心脏、肾脏、肝脏、肠、肺脏、肌肉（大腿）、大脑和骨（大腿）等组织器官称重,然后测定其cpm。经参考源校正后,换算为%id/g。6.大耳兔炎症模型显像:取正常大耳兔3只,分别于右后肢内侧注射松节油500μl,常规饲养7天后形成局部无菌性炎症。siemenssymbiat6spect/ct,矩阵256×256,余参数同4。家兔绑定于实验木板上（仰卧位）,胸腹部对准探头视野中点。99mtc-tp1724经左耳缘静脉注射74mbq,并于0.5、2和5h分别预置计时600s、636s、714s、801s、898s、990s采集静态图像1帧。利用roi技术计算各时相点炎症灶及其对侧正常软组织放射性的t/nt比值。结果1.99mtc-tp1724制备:化学方法合成tp1724的纯度为97.80%;99mtc-tp1724的标记率为（96.57±0.71）%,其比活度（直接法）为（25.52±0.29）tbq/mmol。2.理化性质鉴定:在室温下,标记的溶液放置1h、2h、4h后,99mtc-tp1724的rcp分别为（95.74±1.53）%、（95.50±2.06）%与（93.64±2.25）%。99mtc-tp1724一步法标记冻干试剂盒4℃保存12周,标记率均稳定在90%以上。温育99mtc-tp1724和正常人的血清,sephadexg50柱层析结果表明:实验组的主放射峰形状与对照组的主放射峰形状基本上保持一致,保留时间均出现在第42管;实验组在第16管左右出现小蛋白结合放射峰,约占6.61%。hplc显示:tp1724的保留时间和99mtc-tp1724洗脱液rp的时间基本上一致（大约10min）。半胱氨酸置换实验显示,未结合99mtc与对照组相比无明显增加。标记多肽脂/水分配系数lgp为-（1.99±0.02）。3.正常大耳兔体内示踪动力学实验:家兔血液平均放射性浓度-时间数据经dsa3.1.6软件智能化分析判定,99mtc-tp1724的示踪动力学符合权重为1的二室模型;分布半衰期t1/2α为（2.64±1.32）min,消除半衰期t1/2β为（78.36±13.38）min,cl（清除率）为（122.15±56.33）ml/min。4.正常大耳兔体内spect显像:心脏、肝脏及双肾在1min左右清晰显影,双肾和肝脏的影像随着时间渐渐地减弱;在5min时大耳兔的膀胱开始显影,随着时间显著增强;0.5h时心脏、软组织放射性浓聚影大幅度消退,胆囊这时放射性浓聚影出现,肠道出现节段性很少的放射性分布;胃区在整个显像过程中表现为放射性缺损区,脑部表现为低放射本底影,颈部（包括甲状腺区）未见异常放射性浓聚影。5.正常昆明小鼠体内生物分布研究:99mtc-tp1724经小鼠尾静脉注射后,1h时相的血液放射性比1min时相下降了98.43%,而肾脏放射性下降82.14%;肝脏放射性10min时开始下降,在0.5h时肠道的放射性开始增加;心脏、骨及肺脏的放射性快速地减少,大概在1h后与肌肉接近;脑部表现为持续性、低放射性分布。6.大耳兔炎症模型显像:炎症灶在0.5h左右开始显影,roi技术分析0.5h、1h、2h、3h、4h和5h的炎症侧/对照侧（t/nt）的放射性比值分别为2.19±0.12、2.17±0.11、2.05±0.13、2.02±0.15、1.96±0.19与1.68±0.21。结论1.本课题研究制备99mtc-tp1724的方法简单、易操作,保证标记率>95%（间接法标记）,不需要分离纯化,可以直接应用;易于制备一步法标记冻干试剂盒,便于临床推广应用;2.标记率和比活度高,符合受体体内外研究要求;血液中快速清除,大部分排泄是经过泌尿系统;稳定性好、体内动力学性质优良。为进一步开展vpac1阳性肿瘤显像实验研究奠定了基础。