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糖蛋白在各种生物事件中发挥着重要作用,因此对特定糖蛋白的选择性提取具有十分重要的临床意义。运用分子印迹技术获得的印迹聚合物,可特异性识别目标(模板)糖蛋白。目前较为成功的方法是采用表面印迹结合模板预固定技术制备糖蛋白印迹薄膜。通常借助硼酸基团对糖蛋白进行亲和固定。硼酸亲和固定需要碱性环境,一方面会影响甚至是破坏蛋白的天然结构,另一方面不利于对生理体液中的糖蛋白直接提取。刀豆蛋白(Con A)是一种四聚体糖结合凝集素,可以在中性条件下与糖单元特异性结合。本研究拟以ConA替代传统的硼酸基团,预固定模板糖蛋白。结合化学和生物特异性方法在磁性纳米粒子表面修饰Con A,探究了印迹功能单体多巴胺在中性条件下自聚的条件。以此为基础,在中性条件下固定模板分子,而后在中性氧气氛下构建聚多巴胺印迹涂层。同时研究了硼酸缓冲液竞争性洗脱提取蛋白的方法,探讨了硼酸缓冲液对糖蛋白二级结构的影响。对获得的印迹材料的印迹效率和选择性进行评价。本研究制备了辣根过氧化物酶(HRP)和转铁蛋白(TRF)两种印迹薄膜,重要的实验结果如下: 激光共聚焦显微镜(CLSM)观察证明磁性纳米粒子表面成功修饰Con A;对多巴胺溶液颜色的观察及对其在420 nm的可见光吸收值的监测结果表明多巴胺可以在中性条件下,通过连续补充氧气氛,较为快速地自聚,形成聚多巴胺层;总抗氧化能力试剂盒(ABTS)显色法表明硼酸缓冲液可以洗脱印迹材料中的模板糖蛋白HRP,且其酶活性仍然保持;圆二色谱(CD)表明硼酸缓冲液洗脱模板糖蛋白,比较温和,既不影响Con A的结合活性,也不影响洗脱后得到的糖蛋白的二级结构;等温吸附结果表明印迹材料和非印迹都满足Langmuir吸附模型;不同pH溶液的静态吸附实验结果表明获得的印迹材料在中性缓冲液(与制备印迹聚合物的pH相同)下具有最大吸附量和最佳的印迹效果;单一选择性和竞争性吸附实验(SDS-PAGE)结果表明,获得的印迹材料对模板蛋白具有较高的选择性。 在生物制药工程中,大规模的红霉素工业分离依赖于溶剂萃取和结晶,造成环境污染,且提取成本比较高,因此发展新型的红霉素提取分离技术至关重要。本研究中,运用分子印迹的手段,以玻璃纤维为基质设计红霉素表面分子印迹吸附剂,对红霉素进行选择性分离和提取。傅里叶红外(FT-IR)、示差扫描量热法(DSC)和能谱分析(EDS)结果表明玻璃纤维表面的成功接枝引发剂;静态吸附结果表明印迹聚合物对红霉素的吸附量可达23 mg/mL;选择性吸附实验结果表明,印迹聚合物对红霉素具有较高的选择性。