目的白假丝酵母菌(Saccharomyces albicans,即白色念珠菌)是口腔正常微生物群的组分之一,也是口腔中重要的条件致病真菌,在宿主机体条件发生变化时,可引起严重程度不等的体表感染和深部真菌感染,尤其常见于免疫缺陷患者。恶性肿瘤患者手术前后常规采用的抗肿瘤放化疗,导致肿瘤患者免疫力受损而出现各种并发症,其中口腔真菌感染是最常见的并发症,有研究证实,口腔黏膜的真菌感染与系统性真菌感染密切相关,而系统性真菌感染导致的死亡率非常高,约达4096。相关报道指出免疫缺陷导致的假丝酵母菌感染成为近年来恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一,增加了临床上对抗真菌药物的使用。但许多报道指出白假丝酵母菌对目前用于临床的大多数抗真菌药具有高度耐受性,包括两性霉素B和氟康唑,是导致临床上许多系统性感染难以根除的重要因素。但大部分体外耐药方面的信息都是来源于对免疫缺陷综合征患者伴发OPC的研究,仅有几项大型的调查研究是针对伴真菌血症的普通患者,少有针对癌症患者的研究。并且这些相关研究普遍存在不足——同一时期从同一宿主随机分离单一克隆进行研究。而事实上在个体口腔假丝酵母菌群不同菌株间在表型、基因型及药敏性等方面均存在明显差异。而且口腔假丝酵母菌的分布有地域特点,不同菌种、同种内不同菌株间在致病性和耐药性方面存在差异。此外假丝酵母菌感染具有以下5个特点：高院内感染率,高死亡率,低实验室诊断率,低临床诊断率,病情恶化快。因此研究肿瘤患者口腔中以白假丝酵母菌为代表的假丝酵母菌群的检出情况、分子生物学特征及抗真菌药物敏感性,是白假丝酵母菌分子流行病学研究的重要内容,对白假丝酵母菌的流行病学和致病性研究有重要价值。本课题研究以白假丝酵母菌(Saccharomyces albicans)为代表的假丝酵母菌在化疗肿瘤患者口腔中的分布情况,并对检出的白假丝酵母菌进行氟康唑药敏性及基因方面的异质性研究,为临床上正确诊断及科学合理的选用抗真菌药物提供可靠的参考依据。材料和方法1.化疗患者口腔白假丝酵母菌的分布及基因分组研究从52例接受化疗1年以上的肿瘤患者口腔中取样,采用颊黏膜拭子法,CHROMagar CandidaTM鉴定培养基初步鉴定,分离的白假丝酵母菌再经马血清诱导芽管形成和玉米吐温琼脂培养产生厚膜孢子进一步鉴定。次培养后采用针对白假丝酵母菌25S rDNA中的一段可转移的内含子设计的一对引物对检出的白假丝酵母菌进行基因分组,并与前期我们对健康人群口腔假丝酵母菌分布的研究结果比较,分析白假丝酵母菌在化疗患者口腔中的分布及其基因型特点。2.化疗患者口腔白假丝酵母菌的氟康唑药敏性基因异质性研究对检出的白假丝酵母菌采用随机扩增多态性DNA (Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD)指纹技术对其进行基因异质性研究。本实验中选用了一对经典的随机引物RSD6、RSD12。白假丝酵母菌抗真菌药物敏感性通过测定氟康唑MICs来确定。根据CLSI公布的致病性酵母菌抗真菌药敏试验方案M27-A2,采用微量稀释法进行MIC的测定,过程如下：收集用YPD过夜培养的菌液,用RPMI 1640稀释至每毫升1×103个,96孔细胞培养板每孔内加入100μL菌液和2倍梯度稀释的氟康唑100μL,放置于37℃培养箱中,24～48h后读取MIC值。结果1.肿瘤患者口腔假丝酵母菌检出率为53.85%(28／52),白假丝酵母菌的检出率为48.08%(25／52),其余为光滑假丝酵母菌5.77%(3／52),未发现克柔假丝酵母菌、都柏林假丝酵母菌及其它类型假丝酵母菌；未发现两种假丝酵母菌共存现象；白假丝酵母菌基因分组A、B、C组均有检出,其中以B组为主,59.57%(112／188)。2.RAPD指纹技术方法成功的从188株白假丝酵母菌中诱导出21种基因型,其中两条随机引物RSD6、RSD12分别诱导出17种和2种基因型；在同一时期从同一个患者分离的不同菌株大部分表现为相同的基因型,但在氟康唑药敏性方面表现出明显的异质性。在同一患者口腔内也可发现具有不同的MICs及基因型的菌株共存现象。结论肿瘤患者口腔的假丝酵母菌仍然以白假丝酵母菌为主,与健康人群的口腔中白假丝酵母菌A组占有绝对多数的情况不同,B组白假丝酵母菌在化疗患者口腔中占主导地位。具有不同基因型及氟康唑药敏性的白假丝酵母菌可同时存在于同一患者口腔内。