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金丝桃素和伪金丝桃素是中药贯叶连翘中主要的苯并二蒽酮类活性成分,获取高纯度的上述成分对于进一步的药理药效研究以及药材的质量评价均具有重要意义。本论文将集成化扩张床色谱与高速逆流色谱相结合,用以实现从贯叶连翘中高效获取高纯度单体金丝桃素和伪金丝桃素。 首先优化了贯叶连翘中苯并二蒽酮类成分的超声提取条件,通过静态和动态实验筛选分离用大孔吸附树脂,并对所选树脂的分离工艺进行研究。最终确定的超声提取和大孔树脂分离方法为:15倍量70%的乙醇溶液超声提取2次,每次40min,提取液减压蒸干,用40%乙醇溶液复溶后上样,以D101大孔树脂为分离介质,上样速率为0.5BV/h,用6BV70%乙醇溶液在2 BV/h的速率下洗脱目标物。 其次,采用超声辅助提取-扩张床吸附色谱集成化系统,从贯叶连翘中提取及初步分离苯并二蒽酮类成分。运用响应面曲线法对提取、吸附条件进行优化,确定以60mLD101大孔树脂作为吸附剂时集成化系统的操作参数为:床层扩张比为1.6,60℃下动态提取吸附180min,然后以6BV的70%乙醇溶液洗脱扩张床中吸附的目标物。所得提取物中,苯并二蒽酮类成分含量为2.9%,回收率为65.8%。 最后,对贯叶连翘的扩张床提取物用高速逆流色谱进一步分离纯化,筛选出正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(1∶2∶1∶2,v/v/v/v)为溶剂体系,优化了转速、流动相流速和温度等逆流色谱操作参数。采用流速梯度策略,经过两步逆流色谱分离,最终得到金丝桃素2.2mg,纯度95%;伪金丝桃素5.6mg,纯度95.5%。