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第一部分胸腺基质淋巴细胞生成素受体在血小板的表达目的：观察人和小鼠血小板是否表达胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)。方法：制备人洗涤血小板和10周龄野生型C57BL/6小鼠洗涤血小板,采用Western blot和流式细胞术检测血小板表面胸腺基质淋巴细胞生成素受体的表达,树突细胞作为阳性对照。结果：人及小鼠血小板均表达胸腺基质淋巴细胞生成素受体。结论：TSLPR在人及小鼠血小板表面表达,胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)作为炎性细胞因子是否直接或间接参与血小板粘附、聚集等功能,TSLP/TSLPR通路是否对血小板功能及血栓的形成有影响值得进一步深入研究。目的：研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对血小板功能的影响方法：制备人洗涤血小板,给予TSLP进行刺激。采用血小板荧光-聚集分析仪检测TSLP对血小板聚集功能及血小板三磷酸腺苷(ATP)释放反应的影响；采用流式细胞术检测血小板膜糖蛋白P选择素、GpⅡb/Ⅲa (PAC-1)的表达。结果：TSLP单独刺激引起微弱的血小板聚集及ATP释放,明显低于二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶诱导的血小板聚集及ATP释放；TSLP刺激明显放大ADP、凝血酶诱导的血小板聚集。TSLP单独刺激引起血小板P选择素、GpⅡb/Ⅲa的少量表达；TSLP刺激明显增强ADP、凝血酶诱导的P选择素、PAC-1的表达。结论：TSLP可通过与TSLPR结合促进血小板活化,TSLP/TSLPR可能与血小板激动剂以共刺激形式增强血小板激活。目的：研究胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)敲除对血小板功能及血栓形成的影响和可能作用机制方法：制备野生型C57BL/6小鼠及TSLPI敲除(TSLPR-/-)C57BL/6小鼠洗涤血小板,给予TSLP进行刺激,采用血小板荧光-聚集分析仪检钡TSLPI缺陷对凝血酶诱导的血小板聚集及释放功能影响；采用流式细胞术检测TSLPI缺陷对血小板P选择素、Gp Ⅱb/Ⅲa表达的影响；采用流动小室分析在高、低剪切力情况下TSLPI缺陷对血小板聚集及血栓形成的影响;采用微型多普勒血流探测器检测TSLPI缺陷对三氯化铁诱导的小鼠颈动脉损伤血栓模型血栓形成的影响；采用Western blot检测,分析PI3K/Akt信号通路在TSLP诱导的血小板激活中作用及TSLPR缺陷对TSLP诱导的血小板Akt磷酸化影响。结果：与野生型对照组比较,TSLPI基因敲除小鼠的血小板聚集及释放明显减少：在高、低低剪切力情况下TSLPR基因敲除小鼠的血栓形成明显减少；TSLP刺激缩短血栓模型小鼠颈动脉血管阻塞时间,TSLPI基因敲除血栓模型小鼠血管阻塞时间明显延长;TSLP刺激明显增加人血小板Akt磷酸化,加入PI3K通道阻滞剂(wortmannin、 LY294002)后明显降低TSLP诱导的血小板P选择素、GpⅡb/Ⅲa表达及血小板Akt磷酸化；与野生型对照组比较,TSLPI基因敲除小鼠血小板Akt磷酸化明显下降,血小板P选择素、GpⅡb/Ⅲ表达明显下降。结论：胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)敲除导致TSLP诱导的血小板聚集、释放功能受损；TSLPI缺陷使TSLP诱导的血栓形成受损；TSLP/TSLP通过PI3K/Akt信号通路促进血小板的激活。