目的:糖尿病和牙周炎是全球范围内发病率较高的疾病,且存在双向关系。牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）在牙周组织的修复中起着重要作用。内质网应激（endoplasmic creticulum stress,ERS）在糖尿病和牙周炎的病理中起着重要作用,可能参与了高糖状态和炎症微环境抑制PDLSCs修复牙周组织功能的过程。本研究旨在探索高糖和牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）通过ERS促进PDLSCs凋亡的作用机制,为减少高糖状态和炎性微环境中PDLSCs凋亡从而促进牙周修复提供理论指导和治疗靶点。方法:原代培养人PDLSCs,有限稀释法对PDLSCs培养纯化后进行鉴定:流式细胞仪分析细胞表面标志物;成骨诱导液培养3周后,茜素红染色;成脂诱导液培养3周后,油红O染色。构建高糖、细菌及高糖+细菌感染PDLSCs的体外模型,采用透射电镜及荧光显微镜检测PDLSCs内质网（endoplasmic creticulum,ER）变化;采用流式细胞术及Tunel细胞凋亡检测试剂盒检测PDLSCs的凋亡变化;实时荧光定量PCR实验和蛋白免疫印迹实验检测ERS、凋亡相关基因和蛋白——蛋白激酶样R内质网激酶（protein kinase R-like ER kinase,PERK）、葡萄糖调节蛋白78（glucose regulaing protein 78,GRP78）、激活作用转录因子4（activating transcription factor-4,ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP）的表达水平。使用si RNA对PERK进行沉默,荧光显微镜和流式细胞术检测PERK沉默效率;实时荧光定量PCR实验和蛋白免疫印迹实验观察下游ERS相关基因和蛋白ATF4及凋亡相关基因和蛋白CHOP的变化。实验数据的统计分析采用Graph Pad Prism 8及SPSS 25.0软件,P<0.05认为有统计学差异。结果:1.有限稀释法纯化培养的PDLSCs呈长梭形,细胞较大;流式细胞术结果表明,间充质来源的表面标志物CD29、CD44、CD105和CD146为阳性表达,造血系来源的标志物CD34、CD45为阴性;茜素红染色发现形成大量矿化结节;油红O染色发现细胞内及细胞间有脂滴形成。2.透射电镜下观察到,与空白对照组相比,高糖组、细菌组、高糖+细菌组均有ER扩张,其中高糖+细菌组ER扩张的程度最大;荧光显微镜及平均荧光强度分析结果显示,与空白对照组相比,其余三组平均荧光强度均有增强,其中,高糖+细菌组增强最为明显;流式细胞术结果表明,空白对照组、高糖组、细菌组、高糖+细菌组细胞凋亡率分别是9.33±0.12%,12.87±0.29%,13.9±0.14%,17.8±0.08%;Tunel细胞凋亡检测试剂盒结果显示,与空白对照组相比,其余三组均有细胞凋亡增多,其中高糖+细菌组凋亡细胞增多最为明显;实时荧光定量PCR实验和蛋白免疫印迹实验结果显示,与空白对照组相比,其余三组PERK、GRP78、ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表达水平均有上调（P<0.01）,其中,高糖+细菌组上调最为明显,与前三组相比,差异亦均具有统计学意义（P<0.01）。3.PERK沉默后,荧光显微镜下可见绿色荧光几乎散在分布在所有细胞内;流式细胞术结果显示,转染效率为96.3±0.2%;实时荧光定量PCR实验结果显示,与阴性对照组相比,PERK-1318、PERK-1713、PERK-926转染后PERK mRNA的表达均有不同程度的下调,其中PERK-1318下调最多;实时荧光定量PCR实验和蛋白免疫印迹实验结果显示,与阴性对照组相比,空白对照组ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义,其余各组有不同程度的上调,其中高糖+细菌组上调最多（P<0.05）。各转染后处理组与相应处理组相比,即小干扰RNA+高糖组与高糖组,小干扰RNA+细菌组与细菌组,小干扰RNA+高糖+细菌组与高糖+细菌组相比,ATF4、CHOP的mRNA和蛋白表达水平均有所下调（P<0.05）。结论:高糖状态、P.gingivalis感染及两者同时存在时,会导致PDLSCs发生ERS进而诱导凋亡,且两者同时存在时,协同促进细胞发生ERS所诱导的凋亡,初步证实PERK-ATF4-CHOP通路参与其中。