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目的:酒精性肝病(ALD)是由于长期大量饮酒(嗜酒)所致的肝脏损伤性疾病。近年来中国酒精性肝病的发生率呈明显上升趋势,已经成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。目前国内外尚无防治酒精性肝病的特效药,而中医中药因副作用相对较小具有广泛的应用和开发前景。李佃贵教授认为,ALD的病因病机为,醇酒湿热有毒,酒毒伤胃,胃失和降,浊邪阻滞,酒毒与浊邪阴阳交争,搏结为“浊毒”,停滞中焦,留于胁下,日久留恋不去。浊与毒反复胶结,成为酒精性肝病发生的关键。李佃贵教授根据ALD浊毒阻滞中焦的病机拟定化浊解毒汤,由葛根、田基黄、荷叶、茵陈、丹参等组成,具有化浊解毒,清热利湿,肝胃同治的功效。本研究拟通过实验研究,观察化浊解毒汤的疗效,并探讨其作用机理,为中医药治疗ALD提供疗效确切可靠的药物,为浊毒致病理论提供临床和实验基础。本研究旨在通过建立慢性酒精性肝病大鼠模型,观察以化浊解毒法立法的化浊解毒汤对酒精性肝病大鼠组织病理学、血清学、免疫组化等指标的影响,试图探讨化浊解毒汤治疗酒精性肝病作用机制,验证化浊解毒法治疗酒精性肝病的可行性和实用性。方法:将健康雄性SD大鼠60只,体重190-210g,随机分为五组:正常组(A)、模型组(B)、甘利欣组(C)、化浊解毒汤低剂量组(D)、化浊解毒汤高剂量组(E)。除正常组外,其余四组均采用二锅头白酒—玉米油混悬液灌胃方法制备大鼠酒精性肝病的动物模型。造模8周后,B、C、D、E四组分别给予生理盐水、甘利欣、化浊解毒汤低剂量、化浊解毒汤高剂量进行对照研究。实验同时观察动物的神态、外观、活动情况。在实验第12周全部处死大鼠,取大鼠血清做肝功能、肝纤维化、CAT和IL-8指标检查,取大鼠肝组织做HE染色及COX-2的免疫组化。所有数据均用spss11.5软件处理,组间显著性检验采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法。结果:1一般情况正常组大鼠毛色光泽、精力充沛、行动自如、食量及大便正常。模型组大鼠每天早晨灌酒后不久就出现动作迟缓,四肢瘫软,步履蹒跚。皮毛疏松欠光泽,精神萎靡,体形消瘦,易激惹。体重后期下降,有的粪便变稀松。用药1周后,各治疗组灌胃时,大鼠反抗力增强,大小依次为高剂量组、低剂量组、西药组。2肝脏组织病理学变化2.1各组大鼠肝脏大体观察肉眼观察正常组肝被膜光滑,表面颜色暗红,色泽鲜亮,弹性好。模型组肝脏表面粗糙,色泽晦暗,体积增大,呈淡黄色,触之较正常略硬,切面油腻感。西药组和中药组肉眼无明显特征。2.2各组大鼠肝脏切片HE染色正常组:肝脏组织结构完整,肝小叶结构清晰,肝板以中央静脉为中心向周围呈放射状整齐排列,核大而圆,位于细胞的中央。模型组:以肝脏脂肪变为主,肝细胞肿大,以小叶中央区受累明显,胞浆内可见大小不等脂滴,汇管区可见淋巴细胞和浆细胞浸润,偶见酒精透明小体(Mallory小体)。甘利欣组:脂肪变性显著减轻,可见肝细胞轻微增大,部分细胞出现较小脂滴,散在于细胞核周围,偶见汇管区少量淋巴细胞和浆细胞浸润。化浊解毒汤低剂量组:脂肪变性显著减轻,可见肝细胞内细小脂肪空泡和细胞嗜酸性变,且小叶间有散在的炎性灶及血管周围炎。化浊解毒汤高剂量组:肝细胞脂肪变性已基本消失,仅在高倍镜下见部分肝细胞浆内小的空泡变性及炎性灶。3酒精性肝病大鼠血清中肝脏各指标的变化3.1肝功能的变化模型组大鼠血清中AST、ALT含量明显高于正常组(P<0.01)。给药后各治疗组AST、ALT含量明显低于模型组(P<0.05),其中化浊解毒汤高剂量组大鼠血清中AST、ALT含量明显低于西药组、低剂量组(P<0.05)。3.2 CAT活性的变化模型组大鼠血清中CAT含量较正常组明显降低(P<0.01)。给药后各治疗组CAT含量均高于模型组(P<0.05),其中化浊解毒汤高剂量组大鼠血清中CAT含量明显高于西药组、低剂量组(P<0.05)。3.3肝纤指标的变化模型组大鼠血清中HA、PⅢP含量较正常组明显降低(P<0.01)。给药后各治疗组HA、PⅢP含量均高于模型组(P<0.05),其中化浊解毒汤高剂量组大鼠血清中HA、PⅢP含量明显高于西药组、低剂量组(P<0.05)。3.4 IL-8活性的变化模型组大鼠血清中IL-8含量较正常组明显降低(P<0.01)。给药后各治疗组IL-8含量均高于模型组(P<0.05),其中化浊解毒汤高剂量组大鼠血清中IL-8含量明显高于西药组、低剂量组(P<0.05)。4肝脏组织经免疫组化(SP法)染色COX-2的表达正常组大鼠肝脏无COX-2的表达。模型组大鼠肝组织内COX-2的表达明显增强(P<0.01),呈棕黄色的COX-2阳性颗粒弥漫于细胞浆。给药后各治疗组COX-2的表达均高于模型组(P<0.05),其中化浊解毒汤高剂量组COX-2的表达明显高于西药组、低剂量组(P<0.05)结论:1本研究采用二锅头白酒—玉米油混悬液灌胃方法制备大鼠酒精性肝病的动物模型,经肝组织病理证实,模型制备成功且简单经济。2以化浊解毒立法所制的化浊解毒汤能够逆转肝组织脂肪变性和纤维化,保护肝脏功能,提高抗氧化损伤能力,减轻炎症反应,从而具有防治酒精性肝病的作用。3以“浊毒”立论治疗ALD具有可行性和实用性,为防治酒精性肝病提供了新的思路和方法。