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鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium，St）是一种肠道致病菌，其宿主广泛，没有特异性，可存在于多种家畜、家禽、飞禽、鼠类及其他小动物和人类的肠道中，有很强的致病性，可导致胃肠炎、发热、副伤寒和腹泻等疾病，严重威胁到养殖业。并且该菌可引起人类食物中毒和其他疾病，危害人类健康。因此，对该菌的控制和预防在医学、兽医学和公共卫生学上均具有十分重要的意义。基于耐药性和食品安全方面的考虑，接种疫苗是控制和预防鼠伤寒沙门氏菌病的最佳选择。随着分子生物学的发展和对细菌遗传学的研究不断深入，通过基因工程方法制备鼠伤寒沙门氏菌疫苗取得了很大成就，已初步得到应用并显示出良好的前景。本研究旨在研制更加安全有效的减毒鼠伤寒沙门氏菌基因缺失株，并为进一步将其开发为弱毒苗特别是适于黏膜免疫的口服疫苗活载体奠定一定基础。以编码环化腺苷酸（cAMP）合成酶的cya和编码cAMP受体蛋白的crp基因作为鼠伤寒沙门氏菌SL1344株的减毒基因，在本室已经缺失cya基因的基础上进一步缺失crp基因，构建鼠伤寒沙门氏菌SL1344株cya/crp双基因缺失突变株，对比各菌株生物学特性并对双缺失株的免疫原性进行初步研究。主要内容包括：1.鼠伤寒沙门氏菌crp cyaSL1344缺失株的构建及筛选以含有重组自杀性质粒pRE crp的大肠杆菌χ7213为供体菌，鼠伤寒沙门氏菌cyaSL1344为受体菌，利用重组自杀性质粒介导细菌基因等位交换的作用，两步法筛选出无抗性的crp cyaSL1344双基因缺失株，并通过PCR及测序鉴定，确定构建成功。2.缺失株crp cyaSL1344与各菌株生物学特性的比较研究对双基因缺失株crp cyaSL1344的表型、遗传稳定性、生长特性以及对雏鸡的致病力等生物学特性进行初步研究，并系统的对比4种菌株的生物学特性，结果发现，双缺失株与野生株SL1344相比，生化特性发生明显变化，Δcrp cyaSL1344失去了利用麦芽糖、甘露醇、山梨醇等碳源的能力，也不能分解H2S，但保留了利用葡萄糖的能力，这些都与亲本株cyaSL1344及crpSL1344一致，但是对个别糖的分解利用能力却有变化，不能分解半乳糖和鼠李糖；4种菌株的明胶液化试验、尿素酶试验、触酶试验、L-赖氨酸脱羧酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、枸缘酸盐利用试验结果都一致，血清型也相同，均为1,4,5,12:i:1,2；双缺失株Δcrp cyaSL1344能够稳定遗传缺失后的crp基因，毒力进一步降低，较野生株SL1344减毒至少106倍。3.缺失株crp cyaSL1344对雏鸡免疫原性初步观察以Δcrp cyaSL1344口服免疫4日龄雏鸡后，利用间接ELISA法检测雏鸡血清中IgG抗体，观察免疫雏鸡IgG抗体水平的动态变化，初步观察双缺失株Δcrp cyaSL1344对雏鸡的免疫原性。结果发现：雏鸡免疫后，同对照组相比较，免疫组血清抗体IgG明显高于对照组。免疫组雏鸡的血清抗体IgG含量呈逐渐上升趋势，在第23周左右抗体IgG含量达到高峰，在免疫后的第21d开始逐渐下降。初步表明其对雏鸡有良好的免疫原性。