由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是一种烈性、急性、热性、高度接触性的传染病。该病能够感染多种偶蹄家畜,使动物生产性能下降,而且还导致疫区畜产品的上市和出口会受限制,给各个国家及地区的动物贸易带来了巨大的经济损失,因此一直受到世界各国的广泛重视。目前,快速准确地诊断以及切实有效的疫苗是防控口蹄疫的关键。因此,开发更为敏感、快速、准确的诊断试剂对口蹄疫的防控具有十分重要的现实意义。由于单抗具有纯度高、特异性强、重复性好等突出特点,可用于开发新型诊断试剂和各项基础研究。本研究旨在建立一株或几株能够稳定分泌针对O型FMDV的单抗的杂交瘤细胞系,为开发新型诊断试剂和基因工程新型疫苗提供实验材料；同时,也为今后进一步研究O型FMDV抗原结构、表位生物学功能等病原学研究奠定基础。通过将保存的鼠毒种毒回归乳鼠复壮,利用细胞培养和病毒增殖的方法获得0型FMDV,然后将获得的FMDV进行灭活处理,再经PEG沉淀并浓缩病毒,三氯乙烯脱脂,最后利用蔗糖密度梯度离心法提纯病毒粒子,再通过SDS-PAGE对提纯后的病毒粒子抗原进行纯度检测,同时利用Western-blot进行抗原性分析,结果显示,通过上述方法获得了纯度较高且抗原性好的O型FMDV的完整病毒粒子抗原利用该抗原通过棋盘滴定法建立间接ELISA,确定该抗原的最佳包被浓度为5.0μg/mL,同时将该抗原通过常规免疫的方式免疫BALB/c小鼠,四次免疫后将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞在PEG1500作用下进行融合,制备杂交瘤细胞。经过间接ELISA筛选和3次单克隆化,获得了1株能分泌抗O型口蹄疫病毒的抗体的单克隆杂交瘤细胞株,并且命名为5F10。并且通过动物体内生产法大量制备了5F10单克隆抗体。对5F10杂交瘤细胞产生的腹水利用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法进行纯化后,经SDS-PAGE发现,抗体裂解为重链和轻链,分子量分别在50.0kD和25.0kD左右；经过间接ELISA对5F10单克隆抗体效价进行测定,其细胞培养上清效价为1:512,腹水效价为1:25600；经间接免疫荧光和间接ELISA特异性检测发现,5F10单克隆抗体不与正常BHK-21细胞发生反应,与A型、C型和Asia Ⅰ型FMDV也不存在型间交叉反应；抗体亚型测定结果显示,5F10单克隆抗体为IgG1亚型。O型FMDV侵染BHK-21细胞初步研究表明,应用单抗5F10通过间接免疫荧光检测,O型FMDV感染细胞2h后才能被检测到,病毒仅存在与细胞胞浆中,并且在感染4h后可发现新生病毒粒子突然大量出现。本研究成功制备了抗O型口蹄疫病毒的单克隆抗体,为今后开发新型诊断试剂和基因工程新型疫苗提供实验材料,也为进一步研究O型FMDV抗原结构、表位生物学功能等病原学研究奠定基础。