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量子点(Quantum dots,QDs)是在20世纪70年代后发展起来的新兴纳米材料,是一种能在紫外激发下能够发射荧光的无机半导体纳米粒子。相对于传统的有机荧光试剂,量子点具有吸收光谱宽,发射光谱窄,荧光效率高及发射光谱可调谐的优异性质,在物理学、化学及生物领域的应用引起了各国科学家的兴趣。
在生物领域中,量子点主要应用于生物分子标记、细胞和肿瘤检测、疾病的早期诊断等,而量子点与生物分子偶联是首先要解决的问题,只有对量子点与标记的生物分子相互作用进行较为全面的研究,才能有效地将量子点应用于细胞学及分子生物学等的研究中。本研究合成了谷胱甘肽为稳定剂的CdTe量子点,以牛血清白蛋白(BSA)和5’末端氨基修饰的DNA片段为标记对象,为量子点的生物标记提供实验基础。主要结果如下:
1.对水相合成谷胱甘肽(GSH)稳定的CdTe量子点的方法进行了优化,制备了发射波长为625 nm的红色量子点,量子点的荧光产率为45%;对量子点进行高分辨投射电镜分析,结果表明制备的量子点基本成球状,分散性好,粒径约为5nm;
2.研究了CdTe-GSH量子点对BSA的相互作用,在量子点浓度为1 mmol/L,BSA浓度为20-100 mg/L时,量子点荧光强度F-F0/F0值和BSA浓度C成线性关系,线性回归方程为F-F0/F0=0.01937℃-0.3294,相关系数R=0.9949;
3.研究了共价交联剂EDC和NHS及Tris缓冲溶液、2-巯基乙醇对量子点的影响。交联剂EDC和NHS对量子点有较强的淬灭作用,Tris缓冲溶液对量子点微弱,而2-毓基乙醇对量子点有非常强烈的淬灭作用;
4.优化了最适的CdTe-GSH量子点标记BSA的方法及最佳反应条件。结果表明采用交联剂EDC进行交联的方法简便且效果好,反应物CdTe-GSH量子点、EDC和牛血清白蛋白物质的量之比为1:10:1,室温反应2小时即可达到标记的效果;
5.对连接后的结果进行葡聚糖凝胶层析,层析结果证明CdTe-GSH量子点标记上了牛血清白蛋白;
6.用CdTe-GSH量子点对5’末端氨基修饰的DNA片段进行了标记,葡聚糖凝胶电泳结果显示量子点标记上了DNA片段。共价连接后,DNA对量子点荧光有明显的增强作用,且随着DNA浓度的升高而增强。