乳腺癌在女性癌症中发病率最高的癌症,其死亡率也仅低于肺癌,并且研究发现近年来乳腺癌的发生越来愈年轻化、城市化。因此研究乳腺癌的发生发展分子的机理,鉴定相关标志物,将有利于加深对乳腺癌生理分子机制的了解,并进一步为乳腺癌的临床药物治疗及研究提供理论基础。去泛素化酶在乳腺癌的进程中发挥中重要的调控作用。近年来的研究发现,去泛素化酶MJD家族的含约瑟芬结构域的蛋白1(Josephin domain-containing protein 1,JOSD1)也与癌症的发生发展有关,但是具体机制尚不清晰。细胞异常增殖是恶性肿瘤的一大生物学功能特征,磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)信号通路的激活促进了细胞增殖。磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸-3-磷酸酶和双特异性蛋白磷酸酶(Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate3-phosphatase and dual-specificity protein phosphatase,PTEN)是一种典型的抑癌蛋白,可以作为PI3K/Akt信号通路的拮抗剂。本文从细胞生物学功能入手,探究JOSD1对乳腺癌增殖的影响。主要研究内容如下:(1)利用oncomine数据库分析显示,JOSD1在乳腺癌和癌旁组织中呈现差异性表达;Kaplan-Meier分析,发现了JOSD1的表达与生存率之间存在负相关性,在乳腺癌患者中,JOSD1高表达患者生存率明显低于JOSD1低表达患者。通过MTT实验、克隆形成实验对JOSD1来验证乳腺癌细胞增殖能力的影响,发现了JOSD1能够促进细胞增殖,增加细胞克隆数,加速乳腺癌的细胞进行。此外,通过抑制剂筛选,发现了JOSD1通过PI3K/Akt信号通路调控细胞进程。(2)抑制PTEN的表达可以激活PI3K/Akt信号通路。本文随后研究表明JOSD1通过影响PTEN进一步调控PI3K/Akt信号通路。免疫印迹实验发现JOSD1抑制PTEN的表达;半衰期实验发现JOSD1能够降低PTEN的稳定性。接下来对PTEN的SUMO化进行的探究,发现JOSD1下调了PTEN的SUMO化水平。(3)免疫共沉淀实验发现外源JOSD1与PTEN之间存在相互作用,半内源Co-IP实验进一步验证了二者之间的相互作用,免疫荧光实验发现二者存在共定位,且定位于细胞核,进一步为二者的相互作用提供了亚细胞定位支持。综上所述,JOSD1通过与PTEN的相互作用,抑制PTEN的表达,降低PTEN的稳定性,并降低了PTEN的SUMO化水平,进而激活了PI3K/Akt信号,促进了细胞增殖。