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目的:通过stat3反义寡核苷酸(ASODN)转染与60CO照射喉癌Hep-2细胞株探讨对Hep-2细胞株增殖抑制、细胞周期变化、蛋白表达的影响从而探讨基因治疗与放疗作用之间协同作用的机制。方法:首先在370C、5%CO2、20%O2和95%湿度条件下的湿润恒温培养箱中培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,取对数生长期细胞,分别用于以下实验:1.倒置荧光显微镜下观察stat3ASODN转染、60CO放疗及ASODN转染+60CO放疗作用后Hep-2细胞细胞形态学改变。2.结晶紫法检测不同浓度stat3ASODN +60CO放疗作用后Hep-2细胞增殖抑制率。3.台盼蓝排除实验计数不同条件下细胞死亡率。4.流式细胞术检测5Gy60CO放疗作用前后及200nmol/l、stat3ASODN、stat3SODN转染前后Hep-2细胞的stat3、p-stat3蛋白表达对细胞周期相关蛋白cyclinD1、p21、cdk4表达的影响及其与细胞抑制率的关系。5.流式细胞学检测不同浓度反义寡核苷酸转染联合定量放疗对Hep-2细胞细胞周期及stat3、p-stat3、yclinD1、p21、cdk4蛋白表达的影响。结果:1.Stat3ASODN+5Gy60CO放疗联合作用后细胞形态与单纯放疗和单纯ASODN转染后细胞比较,其形态学改变更加显著,悬浮细胞数量明显增加。2.ASODN+放疗组对细胞增殖抑制的影响明显大于单纯放疗和单纯ASODN转染作用。3.单纯放疗组(5Gy)和单纯ASODN转染组(200 nmol/l)的细胞死亡率比空白对照组增高,而转染+放疗组细胞死亡率较单纯放疗组和单纯ASODN转染组显著增高。4.实验结果显示:反义治疗组的stat3、p-stat3蛋白荧光指数低于空白对照组、脂质体转染组,反义转染+放疗组比单纯放疗组和单纯反义转染组荧光指数降低更加显著。Pearson相关性分析结果显示stat3与p-stat3呈显著正相关(r=0.986 p<0.01)。随着stat3、p-stat3蛋白表达的降低cyclinD1、cdk4蛋白荧光指数呈一致性降低趋势,而p21蛋白荧光指数呈升高趋势,cdk4蛋白表达与stat3、p-stat3蛋白表达分别成正相关(r=0.910 r=0.949 p<0.05),p21蛋白表达与stat3、p-stat3蛋白表达分别成负相关(r=-0.981 r=-0.917 P<0.05)且p21与cdk4之间呈现一定的负相关性(r=-0.973 p<0.01)。Pearson相关分析显示:细胞抑制率的变化与stat3、p-stat3蛋白荧光指数(FI)的变化呈负相关(r=-0.989 r=-0.971 p<0.01)。5.照射后细胞周期分布改变,随着反义寡核苷酸转染浓度的增加,G0/G1期细胞的比例不断增加,同时,处于S期的细胞数不断降低,浓度为100nmol/l、200nmol/l、400 nmol/l时G0/G1期细胞所占比例分别为49.69%、66.00%、83.94%; S期细胞所占比例分别为42.80%、33.05%、10.30%;G2/M期比例变化不定。G0/G1期细胞的比例与转染浓度呈正相关,相关系数斜率为0.9479。正义寡核苷酸转染浓度在100nmol/l、200 nmol/l时G0/G1期细胞的比例无明显变化,但至浓度为400 nmol/l时,G0/G1期细胞占56.3%;G0/G1期细胞的比例与正义寡核苷酸转染浓度无相关性(p>0.05)。60CO照射后随着反义寡核苷酸浓度的增加,stat3、p-stat3蛋白表达均明显降低,组间差别具有统计学意义(p<0.05)。结论:STAT3反义寡核苷酸转染喉癌Hep-2细胞,通过下调STAT3蛋白的表达而对细胞周期蛋白进行调控,从而引起细胞周期分布的改变,达到增强放疗敏感性的作用。